中山大学《细胞生物学》相关问题的分析 绿色荧光蛋白在植物细胞生物学中的应用.pdfVIP

　　文章编号 :100021336 (2001) 0620528203 (本文参加中华基因网第二届“生命之光”征文活动) 绿色荧光蛋白在植物细胞生物学中的应用 鞠传丽1 　王 　东1 ,2 　孔冬冬1 ,2 　胡 　勇1 　何奕昆1 ( 1 首都师范大学生物系 ,北京 100037 ;2 中国科学院植物所 ,北京 100093 ) 　　关键词 :绿色荧光蛋白 ; GFP 融合蛋白 中图分类号 :Q51 ;Q26 　　克隆于海洋动物水母 ( Aequorea victori2 a)的绿色荧光蛋白 (green fluorescent protein , GFP)作为一种新型的非酶性报告基因具有 检测简便 ,结果真实可靠 ,不需要任何外源底 物或辅助因子的特点 ,自出现以来它已引起 人们的广泛兴趣 ,目前已经应用于烟草、柑 橘、拟南芥、玉米、水稻、大豆、苜蓿等多种植 物材料的研究中。 GFP 含有特殊的六肽生色团结构 ,用蓝 紫光激发即能发出肉眼清晰可见的绿色荧 光 ,而无需任何底物或辅助因子。GFP 能与 多种不同蛋白质的 N 端或 C 端融合而保持 与天然蛋白质相似的荧光特性 ,因而可作为 一种直观性很强的遗传标记物。随着 GFP 应用的普及 ,已发展出了各种形式的 GFP 突 变体 ,这些突变体在荧光强度、光谱特性、稳 定性和溶解性上均有不同程度的改变 ,从而 可适用于不同的研究目的。GFP 为植物细胞 生物学的发展开创了新的领域。目前 ,GFP 融 合蛋白已成功地用于植物细胞骨架的动态变 化、细胞器的动态和内膜系统的运输、病毒的 收稿日期 :2001207203 作者简介 : 鞠传丽 ( 1975 —) ,女 ,汉族 ,硕士 ; 何奕昆 (1956 —) ,男 ,汉族 ,教授。 运动和大分子的运输等研究中 , GFP 也可用 于标记特异类型的细胞 ,跟踪细胞信号转导 事件等。 1 . 用于植物细胞骨架研究 以往研究植物细胞骨架通常是采用化学 染料标记的方法 ,即将荧光标记蛋白 (如罗丹 明2微管蛋白) 显微注射到细胞 ,然后用荧光 或共聚焦显微镜对其进行监测 ,这样就可以 观测到植物细胞皮层和纺锤体微管细胞骨架 的动态行为。肌动蛋白细胞骨架的研究也采 用了相似的方法。但是要将标记蛋白注射到 细胞内部 ,尤其是具有细胞壁的植物细胞 ,需 要较长的操作时间 ,并有一定的技术要求 ,而 且只适于分离或暴露的单细胞 ;另外 ,显微注 射对细胞本身来说是一种侵害性行为 ,会干 扰细胞正常的功能。 而应用 GFP 在很大程度上可以克服以 上缺点和局限性。Marc 等[1 ]将 GFP 与微管 结合蛋白24 (microtubule2associated protein 4 , MAP4)的微管结合区融合后转化植物 ,通过 融合蛋白在植物细胞的瞬时表达对表皮细胞 的皮层微管进行了研究 ,揭示出活体中微管 的再定位、伸长、缩短和运输等复杂的动态变 化。Kost 等[2 ]采用相似的方法 ,将 GFP 与 踝蛋白 (一种哺乳动物肌动蛋白结合蛋白)的 肌动蛋白结合区融合 (称作 GFP2m Tn) ,在转 [ 11 ] 　Chalfie M et al . Science ,1994 ,263 (5148) :802 —805 [ 12 ] 　Heim R et al . N at ure ,1995 ,373 (6516) :663 —664 [ 13 ] 　Zhang G et al . Biochem Biophys Res Com m un ,1996 , 227 (3) :707 —711 [ 14 ] 　Llopis J et al . Proc N atl Acad Sci USA , 1998 , 95 (12) :6803 —6808 —825— 《生命的化学》2001 年 21 卷 6 期 烟草花粉管和转化培养的 B Y2 细胞中观察 到 GFP2m Tn 定位于肌动蛋白的丝状体上 , 研究肌动蛋白在细胞中的动态变化。最近 , Mathur 等[3 ]将 GFP2m Tn 和 GFP2MAP4 融 合体以转化拟南芥 ,观察到丝状体发育期间 肌动蛋白丝状体和微管的动态变化。 多光子显微镜可对植物器官的内层细胞 进行研究 ,将多光子与 GFP 技术结合 ,可以 揭示出活体组织深层细胞骨架的动态本 质[4 ] 。而在多标记实验中还可应用 GFP 的 光谱突变体 ,如蓝色荧光蛋白、青色荧光蛋 白、黄色荧光蛋白等 ,来研究不同植物细胞骨 架组分之间的相互作用 ,如微管和肌动蛋白 相互作用的动力学研究。 2 . 细胞器的动态和细胞内膜系统的运输 虽然用荧光染料可以观察一些细胞器如 线粒体和内质网的形态 ,但这些染料不能对 细胞器进行专