1、胶乳偶联方案的输出.docVIP

方案一 实验方法：一步法共价结合 实验步骤： 配制50mM的MES反应缓冲溶液，pH值为6.0； 将蛋白质溶解于反应缓冲溶液中，其浓度为10mg/L； 用反应缓冲溶液稀释胶乳微球，使其浓度为1%（W/V）； 将上述蛋白质溶液与胶乳微球混合，混合后在温室培育20分钟； 用去离子水配制EDAC溶液，浓度为10mg/mL（52μmol/mL）； 取计算量的EDAC溶液加到蛋白质与胶乳微球混合液中； 用0.1M氢氧化钠（NaOH）溶液调整该反应混合液的pH值至6.5±0.2，在摇床温室培育2小时； 将未结合的蛋白质除去，贮藏于缓冲溶液中。 方案二 实验方法：简单二步法共价结合 实验步骤： 配制50mM的MES反应缓冲溶液，pH值为6.0； 将蛋白质溶解于反应缓冲溶液中，其浓度为10mg/L； 用反应缓冲溶液稀释胶乳微球，使其浓度为1%（W/V）； 1mL胶乳微球悬浮液，加入20mgEDAC，在室温培育40分钟，在20分钟后第二次加入20mg/mL； 用相等体积的该缓冲溶液来洗涤胶乳微球，离心，用1倍体积的缓冲溶液重复处理； 将蛋白质溶解于50-100mM的MES缓冲溶液中，蛋白质浓度为1mg/mL； 再将胶乳微球悬浮于去离子水或结合的缓冲溶液中，迅速加入溶解的蛋白质，37℃搅拌反应3小时； 按1mL反应混合液加入2.5μL乙