4第四章资源微生物技术基本实验研讨.ppt

草分枝杆菌的生长曲线 4.6 菌体的红外光谱测定样品制备方法 操作步骤： 1、离心分离菌体； 2、用蒸馏水洗涤； 3、在50 oC的恒温烘箱中干燥； 4、取干燥的菌体与光谱纯溴化钾一起在玛瑙研体中研磨； 5、将适量的粉末放入压片机中，进行压片； 6、用红外光谱仪(510P FT－IR型)对样品进行分析测定。 红外光谱的基本概念 * 红外光谱是一种吸收光谱。在4000～400 cm－1的红外线照射下，有机物分子选择性地吸收其中某些频率后，用红外光谱仪记录所形成的吸收谱带，就称为红外光谱。 * 红外光谱的横坐标是波数（cm－1）或频率；纵坐标是光线的透过率（T％），或摩尔吸收系数来表示： ε＝1/（CL） * lg（I0/I） C—浓度 L—比色池厚度 I—透过光的强度 I0—入射光的强度 为什么不同有机基团会产生不同的红外光谱？ ＊ -OH、-SH、-NH等化学键存在振动。 ＊ 振动形式有：伸缩振动、弯曲振动。 ＊弯曲振动包括： 面内弯曲（剪式振动 、平面摇摆振动） 面外弯曲（ 非平面摇摆振动、扭曲振动） ＊伸缩振动包括： 对称伸缩振动、不对称伸缩振动 ＊ 化学键振动存在振动频率、存在振动能级。没 有外界干扰时，分子处于最低的振动能级。 ＊ 当红外光线照射到有机基团的化学键上时，分 子发生振动能级跃迁，跃迁需要吸收一定的能 量，该能量通常由照射的红外光来供给。 ＊ 化学键的键能、键长、键角、种类如单键、双 键、叁键、共价键、离子键等是决定吸收多少 能量的内在因素，也就是决定红外光谱的峰位、 形状、峰强的内在因素。反过来说，红外光谱 可以提供分子内部键参数的信息。 红外光谱基本原理 红外光谱基本原理 ＊ 红外光谱所提供的能量与有机基团结构的振 动能级差相吻合； ＊ 紫外光线、可见光线提供的能量则不与有机 基团结构的振动能级相匹配； ＊ 红外光线提供的能量不与无机物的分子结构 振动能级相匹配！ 红外光谱识谱法 1、三个重要特征 * 谱带位置：基团的最有用的特征，给出基团的信息 * 谱带形状：给出基团信息 * 谱带的相对强度：给出两个信息， 一是定量的概念；二是指示某特殊基团或元素存在 4000 3500 3000 2500 2000 1500 1000 500 苦味诺卡氏菌的红外光谱 Wavenumber cm-1 Transmittance % Transmittance % 4000 3500 3000 2500 2000 1500 1000 500 Wavenumbers cm-1 吸附了Pb2＋的诺卡氏菌 红外光谱图 吸附了Zn2＋的诺卡氏菌 红外光谱图 诺卡氏菌的红外光谱 吸附了Pb2＋、Zn2＋后的苦味诺卡氏菌体红外光谱分析（一） 诺卡氏菌的红外光谱 吸附Pb2＋后诺卡氏菌 的红外光谱 吸附Zn2＋后诺卡氏菌 的红外光谱 3300.21 cm-1附近 有一强而宽的吸收带 向左偏移113.38 cm-1, 吸收带更窄, 强度明显减弱 向左偏移29.94 cm-1, 吸收带更窄, 强度明显减弱 2964.59 cm-1附近 有弱双峰吸收带 向右偏移41.08 cm-1, 吸收带宽度、强度接近 向右偏移34.08 cm-1, 吸收带宽度、强度接近 1687.25 cm-1附近 有一强而窄的吸收带 向右偏移3.28cm-1, 吸收带宽度、强度接近 向左偏移0.2 cm-1, 吸收带宽度、强度接近 1560.02 cm-1附近 有一中强而窄的吸收带 向右偏移8.46cm-1, 吸收带宽度、强度接近 向右偏移8.46cm-1, 吸收带宽度、强度接近 1453.14cm-1附近 有一弱而窄的吸收带 位置相同，吸收带宽度、 强度略微减弱