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动物细胞工程技术的应用 一、 生产单克隆抗体和细胞因子 （一）生产单克隆抗体 1975年Kohler和Milstein建立B淋巴细胞杂交瘤技术以制备单克隆抗体以来，针对各种抗原的单克隆抗体已被广泛应用于生命科学的各个领域。 B淋巴细胞杂交瘤技术不但将淋巴细胞产生单一抗体的能力和骨髓瘤增生的可能性巧妙地结合起来，并且还可以通过融合进一步的筛选获得具有期望专一的抗体。 单克隆抗体的最主要的优点在于它的专一性、均质性、灵敏性以及无限量制备的可能性。 单抗在生物工程技术中占有很重要的地位，已作为商品进入市场，前景不亚于基因工程产品。其用途有以下几方面： （1）单抗作为体外试剂：单克隆抗体最广泛的商品用途，目前仍然是用作体外诊断试剂。 （2）单抗作为体内诊断试剂：用同位素标记的单抗，在特定的组织中成像的技术，可用于肿瘤，心血管畸形的体外诊断。 （3）单抗作为导向药物的载体：单克隆抗体最大的应用前景是有可能作为导向药物的载体。导向药物是指以具有导向能力的物质为载体的药物，据信在下一世纪导向药物将普遍取代目前的常规药，特别是抗癌药物、抗生素等。 （4）作为治疗用的单克隆抗体：它必须具有专一性高、稳定性好、亲合力强、分泌量大、针对非脱落抗原在靶细胞上的分布密度高等特点，但这是很难获得的。 （二）T淋巴细胞杂交瘤和淋巴因子 T淋巴细胞在免疫系统中占有极重要的位置，它既是调节细胞又是效应细胞。 目前，使T淋巴细胞长期在体外自下而上的方法有四种：①应用外源性的T生长因子[白细胞介素2（interleukin 2，IL－2）抗原不断再刺激的方法，使T细胞系和T细胞克隆；②应用辐射白血病病毒（radiation leukemia virus）来转化T细胞，以建立永久化的T细胞培养系；③从已建立的淋巴瘤系中来筛选有用的T细胞系；④应用杂交瘤技术来建立T淋巴细胞杂交瘤。 目前，对T淋巴细胞杂交瘤还牌理论研究阶段，为进一步用于诊断和治疗打下基础。 二、生产特殊蛋白质和多肽药物 蛋白质及多肽药物的基因工程是生物工程中最活跃和最有成果的领域之一。究其原因，不外两个方面：一是由于蛋白质（多肽）是基因表达的直接产物，便于应用重组DNA技术进行研究和生产；二是在生物体内含量很低。现在人们应用DNA重组技术，将目的基因转入微生物中就可以大幅度增产，降低成本，取得巨大的经济效益，因此，基因工程首先在医药研究方面取得突破是不奇怪的。由于基因工程等生物技术的巨大经济效益和社会效益，世界各国都积极投资去研究和开发生物技术。以1992年为例，美国政府投资38亿美元，日本政府投资8亿美元，大批私人投资尚未计算在内。 世界上现在已有数十种基因工程药吕，其中已被批准临床使用并已商业化的药品列于表11－2。基因工程人胰岛素以可以作为杰出的代表。胰岛素是治疗糖尿病的主要药物。世界上有34万胰岛素患者。过去从猪和牛的胰脏中提了取胰岛素，得率低，而且在临床上有5％的病人有副反应。1979年，美国Genentech基因工程公司将胰岛素基因转入大肠杆菌，1983年已大规模投放市场。人生长激素主要用于治疗侏儒症，同时对烧伤、创伤、骨折等病症也有很好的疗效。由于种族特异性的限制，过去只能从人尸体的垂体中提取，治疗一个病人需要60个垂体，因此远远无法满足需要。1979年美国Genentech公司成功地将人生长激素基因转入大肠杆菌中，一升培养物在7个小时内就能生成相当于60个垂体的生长激素。另外α-干扰素、β-干扰素、红细胞生成素、凝血因子Ⅷ、γ-干扰素、人生长激素、人胰岛素等十余种基因工程药物的销售量在全世界具有大幅度上升的趋势。 三、生产特殊器官和组织 1、皮肤组织工程 人工皮肤是发展较快的一个领域，体外制造人工皮肤不再是一个技术难题，目前已有数种产品用于临床治疗。与传统的治疗方法相比，使用人工皮肤的优点包括：在对烧伤的治疗中可减少对供体组织的需求；减少伤口结疤和收缩现象；对大面积急性伤口可实现快速覆盖；可作为传递外界生长因子的载体等。 人工皮肤基本上可分为三个大的类型：表皮替代物、真皮替代物和全皮替代物。表皮替代物由生长在可降解基质或聚合物膜片上的表皮细胞组成。真皮替代物是用含有细胞或不含细胞的基质结构，用来诱导成纤维细胞的迁移、增殖和分泌细胞外基质。而全皮替代物包含以上两种成分，既有表皮又有真皮结构。 由于相对较小的烧伤市场并不足以支持人工皮肤工程的深入发展， 所以目前主要研究方向是针对不同的临床症状，特别是针对不同病因引起的慢性溃疡开发对其最适宜的产品。 2、人工结缔组织 在重建外科领域，通过多种途径已成功地进行了自体软骨、骨、肌腱等的移植。1994年第一次通过移植自体软骨细胞和骨膜瓣修复外伤性关节。同