色谱定性和定量精编.pptVIP

4. GC操作条件的影响 1) 柱温 柱温对峰面积影响较小，在GC时多采用峰面积定量。 2) 检测温度 热导检测器，用相对定量法 氢火焰离子化，温度对其影响较小 3) 流速 浓度型检测器与浓度成正比 质量型检测器 5. 检测器的影响 待测组分接近或超过检测器保持线性关系的范围时，定量结果不准确 稀释 富集 定量校正因子 使检测器产生的信号能真实反映物质的量 对峰面积进行校正 在定量分析时引入校正因子(f)，指单位峰面积所代表的被测组分的量 1. 绝对校正因子 同一个检测器，同一物质其响应值只与该物质的量有关， 主要由仪器的灵敏度决定，而灵敏度受样品、时间、操作条件等影响 2. 相对校正因子f’ 某物质与标准物质绝对校正因子之比 TCD用苯作标准物质，FID用正庚烷 将相对校正因子简称为校正因子。 样品一定时，f’只与检测器类型有关，与色谱条件无关 1) 质量校正因子f’m 组分的量用质量表示 mi，Ai被测组分的质量和峰面积 ms，As标准物质的质量和峰面积 2) 摩尔校正因子f’M Mi被测组分的摩尔质量 Ms标准物质的摩尔质量 3) 体积校正因子f’M Mi被测组分的摩尔质量 Ms标准物质的摩尔质量 气体样品，摩尔校正因子等于体积校正因子 注意： 物质的校正因子可以通过查阅文献或手册获得； 相对校正因子随检测器的类别和使用的载气不同而有差异 有时候也受物质浓度、仪器结构和操作条件的影响 在引用文献数据和与文献对照时要注意影响因素 3. 峰高定量校正因子fh 适用于用峰高进行定量的色谱峰 受操作条件影响较大，不能直接引用文献值，在实际工作中，需标准纯物质测定。 不适用于不对称的色谱峰和保留时间过小的色谱峰。 4. 响应值 绝对响应值 单位量组分通过检测器时产生的信号值，也成为绝对灵敏度。 相对响应值 被测样品和标准样品绝对应答值的比值。 5. 校正因子的测量方法 纯品的待测化合物和标准物 将二者配成已知比例的混合物 取准确量的该混合物进样，在一定色谱条件下分析 准确测量组分和标准物质所得色谱峰的峰面积 按上述公式计算校正因子 注：测量定量校正因子的色谱条件最好与样品分析时的色谱条件一致或相近。 6. 确定校正因子的其他方法 1) 利用文献。 文献查阅气相色谱检测器的相关组分校正因子 液相影响因素多，难以重复文献中的条件，需要自己进行测定 2) 校正因子的估算 热导池检测器 内插法 加和法 换算法 氢火焰离子化检测器 内插法 有效碳数法 定量方法 把所有出峰组分的含量之和计为100%，计算器中某一组分含量百分数的定量方法，称为归一化法。 适用条件：待测样品中各组分均能流出色谱注，在检测器上都能独立的产生信号 1. 归一化法 若样品中的组分为同系物或同分异构体，校正因子近似相等，可不用引入校正因子，将峰面积或峰高直接利用归已化公式， X 100% X 100% 优点：简便、准确；进样量、流速、柱温等条件的变化对定量结果的影响很小。 缺点 校正因子的测定较为麻烦 必须所有组分都出峰，重叠色谱峰影响峰面积的测定，引起含量误差。 不适用于选择性检测器 归一化法主要用于GC的定量测定，在HPLC中很少使用。 GC中的FID和TCD，对组分的校正因子相近或有一定的规律，从文献中可以查到或计算得到。且当为同系物时，可直接利用峰面积归一化定量 ，操作方便，结果误差较小。 HPLC中，常用的紫外、荧光等检测器对样品的响应值差别较大(即使是同系物)，不能忽略校正因子的影响；另外，该类检测器对某些组分没有响应值。 外标法 HPLC分析中比较常用 操作简单，计算方便，快速的绝对定量分析方法 2. 标准曲线法 1. 标准样品绘制标准工作曲线 配制梯度浓度的标准品溶液，在待测组分的分子色谱条件下，等体积进样，作出峰面积对浓度的工作曲线，即为标准曲线。 标准曲线的斜率为绝对校正因子。 2. 样品测定 在绘制标准曲线的色谱条件下，对相同量或定量的样品进行色谱分析，得到色谱图。 测量色谱峰的峰面积或峰高，根据标准曲线计算样品组分的浓度，得到样品的量。 单点校正法 若得到的工作曲线通过原点，已知待测组分的大概含量，可采用单点校正法。 实验操作 配制一个与待测组分含量相近的已知浓度的标准溶液，在相同的色谱条件下，分别将二者等体积进样，得到色谱图，比较二者的峰面积或峰高，计算得出含量。 标准曲线法的优点： 测定工作操作简单，计算方便 适合于大批量样品分析 给出的为样品的绝对量 缺点： 仪器和操作条件对分析结果影响很大，待测组分需与其他组分完全分离 色谱条件必须完全一致 标准物质的纯度要求较高 样品前处理过程的损耗无法补偿 标准曲线使用一段时间后，需用标准物质进行校正 将纯物质作