半边旗5种成分体外细胞毒活性比较及构效关系分析.pdfVIP

， ；；【j) 6 f一6 、 ＼‘獬。} 药学学报 Acta Pharmaceutica Sinica 1998．33(9)：641～644 半边旗5种成分体外细胞毒活性比较及构效关系分析 粱念慈 张 晓 何承伟 乒 ．j一 ————一 ————一 2 r^ J (广东医学院医用生化研究所， 化学教研室，湛江 524023)一 摘要 用多种人癌细胞株以 MTT试验．体外筛选半边旗抗肿瘤括性成分。结果显示：化台物 5F， 6F．A及半边旗乙醇提取物 PSE对 5种人癌细胞均有不同程度的杀伤作用，且呈明显的剂量依赖关系。 其中6F的活性最强，其次是A，5F．而化合物4F和B对5种细胞均无细胞毒活性。分析它们的构效关系 可口』推测． —B-亚甲基环戊酮结构是其括性部位，结构中羟基数日和位置的不同可以影响化台物的活性强 度。 关键词 ! ；三堕； 括性；塑 罕 7： 从中草药中开发新天然药物和生物活性物 质是当前药学研究的重要课题之一。半边旗 (Pteris 5 mipinnⅡta L PsL)属凤尾蕨科植物， 广泛分布于我国南方各省，民间常用于治疗蛇 伤、外伤出血，抗菌痢、肠炎、肝炎等 J。本课 题组在筛选抗肿瘤植物药时发现，半边旗的乙 t ： 5F： ：C 醇及水提取物显示 良好的体内外抗 肿瘤活 性f ，进一步从醇提物中分离纯化后得到 5个 成分：4F，5F，6F，A及 B，经结构鉴定，B是一个 倍半萜类化合物，其余 4个均为二萜类化合 物[ 。本文 旨在用体外培养的多种人癌细胞 筛选活性化合物，并分析它们的构效关系。 HOCH ^：RI=OR。R==B B GF：冠l=H， =OH Fig 1 The structures of the diterpenoids and sesquiterpenoid from Pteris sereipinnata L 材 料 与 方 法 药品与试剂 半边旗提取物：4F，5F，6F，A 和B(结构如图 1所示)由我所植化室分离纯 化，并鉴定结构。用 DMSO配制成原渡(6F浓 收樯 日期 1997—10—13 本文为广京省科委重 点科拄攻关项目资助f 9622007 002)课题 ‘ E．mail addres：gdmcsh~9gd㈣ edu∞ 度为 10 g·L ，4F，5F，A和 B浓度均为 50 g-L ，PE浓度为 100 g·LI1)，分装冻存，临甩 前用生理盐水或培养基稀释成各所需浓度。但 DMSO在处理细胞时的最终浓度小于或等于 0．1％。RPMI一1640培养基为 Gibco公司产品； MTT(噻唑蓝四氮唑)为 Serva公司产品；新生 小牛血清购于杭州四季青生物材料公司；5-氟 尿嘧啶购于广州化学工业公司试剂厂。 细胞 株 和 细胞 培 养 人 胃腺 癌 细 胞 药学学报 Acta Pharmaeeutica Siniea 1998，33(9)：641～644 (MGC一803)、人低分化鼻咽癌细胞(CNE-2Z)由 广东医学院病理研究所提供；人肺腺癌细胞 (SPC-A．1)、人肝癌细胞(BEL一7402)购于中山 医科大学动物实验中心；人肝癌细胞(HePG II)购于中国科学院上海细胞所。5株人癌细胞 培养于含 15％灭活小牛血清、100 u-ml 青霉 素和 100 g·mlI1链霉素的 RPMI一1640完全培 养基中，置 37℃，5％ CO2饱和湿度孵箱内培 养。细胞经0．25％胰酶分散传代和收获，取对 数生长期细胞进行实验。 细胞毒活性实验 MTT法参照 Hansen 等H 的方法。分别将对数生长期的5种癌细胞 以 0．5～1 x 105·ml 个细胞浓度加入 96孔板 中，待细胞完全贴壁后，用药组分别加入 10 不同浓度 的药液 至终 浓度分别为：4F和 B (0．1，1．0，10，100 g-g·m1 )，5F(4．0，8．0， 16．0，32．0，64．0 g-g-ml ，6F(0．05，0．1，0．2， 0．4，0．8 btg·ml )，A(1．0，2．0，4．0，8．0，16．0 g·m1 )，PSE(5．0，10 0，20．0，40．0，80．0 “g-ml )。阳性对照 5一Fu浓度为 1．25，2．5， 5．0，10．0，20．0 ·ml～。加药后细胞培养 72 h，加 5 nag·ml MTT试剂 20“I，温孵 5 h，再 加甲腊溶解液，37℃保温 3～5 h后，用酶标仪 (Bio-Rad M450)测定吸收度(A)。按公式计算 细胞生长抑制率和Its l5 (表 1)。 Tab 1 Cytotoxicity of the compounds isolated from Pteris Se