梅花鹿茸和马鹿茸多肽化学性质及生物活性比较.pdfVIP

第 26卷第 10期 2001年 10月 中 国 中 药 杂 志 China Journal of Chinese Materia Medica vd 26，Nol0 Oct．2∞ J 梅花鹿茸和马鹿茸多肽化学性质及生物活性比较 周秋丽 ，刘永强 ，王 颖 ，郭颖洁 ，王本祥 (1．长春中医学院 附属医院新药研究中 ，吉林 长春 130021 2．白求恩医科大学 生物工程研究所，吉林 长春 130021) [摘要] 目的：比较梅花鹿茸多肽和马鹿茸多肽化学组成及生物话性异同。方法：用相同工艺提取梅花鹿茸 和马鹿茸多肽组分；采用电泳和质谱等分离分析手段比较多肽组分的化学性质；用[ H]TdR参人细胞DNA比较两 种鹿茸多肽的促细胞增殖活性。结果：梅花鹿茸和马鹿茸多肽组分的电泳图谱和质谱有明显差异，而中国的东北 马鹿茸和新西兰马鹿茸多肽的图谱十分相近；梅花鹿茸和马鹿茸多肽对软骨细胞和表皮细胞分裂都有促进作用， 但马鹿茸多肽对表皮细胞的增殖作用比梅花鹿茸多肽强=结论：梅花鹿茸和马鹿茸多肽的化学性质和生物滔性有 较大差异： [美键词] 梅花鹿；马鹿；鹿茸{多肽；软骨细胞；表皮细胞 [中图分类号]R 285 5 [文献标识码]B [文章编号]1001 5302(2001)10，0699．04 马鹿和梅花鹿是同属不同种的两种动物，但在 中医临床和《中国药典》一直把马鹿茸和梅花鹿茸作 为同一药材人药。近年来，我们在鹿茸制剂的研究 开发中发现 ，马鹿茸和梅花鹿茸提取物的化学成分 、 理化性质和生物活性都不尽相同 鹿茸多肽为鹿茸 主要活性成分巳逐渐得到大家的共识．深入了解梅 花鹿茸和马鹿茸多肽的化学性质、生物活性以及两 者之间的异同很有必要。本文拟用相同的工艺提取 梅花鹿茸和马鹿茸多肽组分 ，并对其化学性质和生 物活性做初步的比较研究。 1 材料和方法 1．1 材料 1．1 1 动物 Wiatar出生 24 h之内的乳鼠；新西 兰大白兔，旱或舍出生4～5周龄，400～700 g，均由 白求恩医科大学实验动物部提供。 1．1．2 药品和试剂 鹿茸多肽组分由长春中医 学院附属医院新药研究中心按照同 一生产工艺分别 从东 北 马鹿 Cerous elaphM Linnaeus和梅 花鹿 Ce~vus nippon Temminck鲜茸中提取的白色冻干粉 末，其中梅花鹿茸多肽占总提取物的 14％(w／w)， 东北马鹿茸多肽占总提取物的 12％(w／w)。新西 兰马鹿茸冻于粉由新西兰茵沃梅农业研究 中心赠 送，按照同一工艺提取多肽组分，多肽含量 占总提 [收稿Et捌] 200l1d2．28 【基金项 目] 国家自然科学基金资助项 取物的 13％(w／W)。胰蛋 白酶和胶原酶为 SIG MA公司产品， H—TdR由中科院原子能院同位索所 提供。 1 1 3 仪器 Phormacia EPs 3500型多用电泳 仪 ；Biomolecular LDI 1700激光解吸 电离飞行时间 质谱仪。 1 2 方法 1．2 l 表皮细胞的分离培养 取出生后 24 h之 内的 Wistar大鼠背部皮肤，去除皮下组织，切成 0．5 CH2×0．5 cm大小的皮肤块，用含青霉素的 D Hank’ s液(100 u-m1 )漂洗 1 h，取出皮肤用 10 ral Dis— pase(1 25 u-ml )在4℃消化20-22 h，分离真皮 和表皮层 将表皮层用 0 25％胰蛋白酶在 37℃消 化 15 min，加入 MEM 培养液 ，吹打分散细胞。将 细胞通过孔径为45 ?m 的尼龙网过滤后悬浮在培养 液中，计数。 1．2．2 软骨细胞的分离培养 取出生后 4～5 周龄的新西兰大白兔，无菌取出肋软骨，分离肥大期 和静止期软骨，切成 1～3 rl3yrt3的小碎块，用磷酸盐 缓冲液(PKS)冲洗 2次 ，用 0 1％EDI、A和O 25％ 胰蛋白酶在 37℃条件温孵 1 h，用 PBS冲洗，再加 入0，2％胶原酶Ⅱ在37℃温孵3 h 吹打分离消化 后的细胞，将细胞悬液通过孔径 45 m的尼龙网过 滤，离心(1 500 r·min ，5 min)去上清，细胞用 DMEM培养液(含 10％小牛血清)冲洗．计数 1．2 3 H TdR参人细胞 DNA[ ， 表皮细胞按 · 699 - 第 26卷第 10期 2001年 10月 中 国 中 药 杂 志 China Journal of Chinese Materia Medica Vol 26．No 10 ()ct．如 0l 每毫升2×10 个密度加人 96孔板中(每孔 0 l m1 )，在 5％C 孵箱(37℃)中培养 24 h之后，每孔加 人以MEM配制的不同浓度样品0．1 mI，继续培