三种水稻基因组DNA快速提取方法的比较.pdfVIP

分子植物育种，2005年，第 3卷，第 5期，第 749—752页 Molecular Plant Breeding，2005，Vo1．3，No．5，749—752 实验方法 EXPERIMENTAL TECHNIQUE 三种水稻基因组 DNA快速提取方法的比较 楼巧君 ·2 陈亮 罗利军 一，z 1上海市农业生物基因中心，上海，201106，2华中农业大学，武汉，430070 通讯作者，lijun@sagc．org．ca 摘 要 用分子标记辅助选择进行精细定位和遗传改良时，首先就需要大批量提取植物 DNA。作为 PCR反 应的模板。水稻基因组 DNA常用的简易提取方法有碱处理法和高温水煮法等，本文改进了常规的 CTAB 方法，提出另一种简便的高质量 DNA提取方法，称“简化法”，并比较了这三种方法提取的DNA在数量、质 量上的差异，以及作为 PCR模板时扩增效果，确定了在精细定位和遗传改良时“简化法”是一种较优的方 法。 关键词 水稻，快速提取 DNA，PCR Comparison of Three Rapid Methods of DNA Extraction from Rice Lou Qiaojun · Chen Liang Luo Lijun ’ 1 Shanghai Agrobiological Gene Center,Shanghai，201 106；2 HuazhongA culture University，Wuhan，430070 Coresponding author，lijun@sagc．org．ca ABSTRACT Hundreds of plants’genomic DNA should be prepared before fine mapping and genetic improv— ing for PCR reaction，aikali and boiling treated methods are often used to rapid DNA extraction．I found a new simple way modified from traditional CTAB method，called“simpler method’ The diference in quality，quanti— ty and pufty of the obtained DNA were comprared，further more their reliability as PCR template also compared， eventually the “simpler method was found to be a beter one when they were used to fine mapping and genetic improving． KEYW ORDS Rice，DNA rapid extraction，PCR 提取 DNA是所有基因型分析的起点，无论是 对种质资源的品种鉴定和分类研究、分子标记辅助 育种，还是重要农艺性状的基因定位、克隆，都需要 大量高纯度的基因组 DNA。根据所用材料的品种、 组织和研究要求的差异各有不同的提取方法，但是 依据所用试剂不同，高质量植物基因组 DNA提法 主要分为 SDS法和 CTAB法。这些提取方法各有 优缺点，但是大都步骤繁多，耗时漫长，而且费用较 高，难以适应分子标记辅助选择和精细定位时需要 大批量提取 DNA的要求，尤其当研究群体很大的 时候，提取DNA就成为一项非常繁重的工作，为此 必须寻找一种既简便又高质量的DNA快速提取方 法。常用的植物 DNA简易提取方法有碱处理法 (Klimyuk et a1．。1993)、高温水煮法 (Thomson and Henry，1995)等。这些一步法大都速度快、成本低，但 是 DNA提取质量差、保存时间短、PCR扩增效果 差。本研究以DNA提取的 CTAB法为根据，摸索出 了一种简单高效的DNA快速提取方法 (以下简称 “简化法)。本文比较了这三种方法提取的DNA在 数量、质量、成本和简便程度上的差异及其用于 PCR扩增时的效果。 1材料与方法 1．1水稻材料 籼型珍汕 97B(f4品 1)和粳型多年生稻 (f4品 2)幼嫩叶片。 1．2三种DNA简易提取方法 分子植物育种 750 M0lecular Plam Breed-mg 1．2．1碱处理法 碱处理法参照桑贤春等 (2003)和 汪秀峰等 (2002)稍有改动。 取 20mg嫩叶片，剪碎置于 1．5ml离心管中，加 200~1 0．25 mol／L的NaOH，在沸水中放置 30s，加 200~