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牙周病诊断技术新进展 四川大学华西口腔医学院 张蕴惠 教授 微生物检查的适应症 微生物检查的主要优点 微生物学检查存在的问题 DNA探针(续)--- 缺点 优点 敏感性和特异性较高 快速简便 棋盘杂交能同时分析大量样本中的多种靶细菌 死亡的靶细菌也能检出 目前只构建了几种可疑致病菌的DNA探针 无法了解细菌对抗生素的敏感性 特别适用于微生态流行病学的调查 限制性内切酶分析 DNA DNA片段 电泳图谱 酶切 电泳 原理 DNA指纹图 限制性内切酶分析(续) 用途 分析P.g、A.a、P.i等牙周可疑致病菌的遗传异质性 对同一种细菌的不同菌株进行基因型分析，寻找致病的毒力克隆 流行病学调查的重要工具 了解牙周可疑致病菌在家族中的分布和传播 聚合酶链式反应 (PCR) 目前敏感性最高的微生物检查，106个微生物中仅有10个靶细菌就能被检出 主要用于有关牙周可疑致病菌在 家族中传播情况的流行病学调查 随机引物PCR (arbitrarily primed PCR, AP-PCR) 原理 引物 样本 大小不等的多个DNA片段 每个菌株特异的电泳图谱 PCR扩增 电泳 用途 寻找A.a、P.g、P.i等可疑致病菌毒力克隆型的重要手段 随机引物PCR (续) 优点 分辨率相当高的DNA指纹技术，可区分同一菌种的不同菌株 无需事先了解靶细菌的DNA序列 可选择任意引物进行扩增，常用多个随机引物同时扩增一种靶细菌，以提高分辨率 操作简便快速 细菌抗原的免疫分析 原理 用荧光或显色物质标记的单克隆/多克隆抗体 靶细菌特异的表面抗原 检 测 优点 敏感性和特异性高，靶细菌达到102-103即可被检出 缺点 目前仅制备了少数几种可疑致病菌的特异抗体 椅旁检测系统 Evalusite 一种酶联免疫吸附实验 用于检测P.g、P.i、A.a抗原 辣根过氧化物酶标记的多克隆抗体 菌斑样本 8min内 出现粉红色点为阳性(观察颜色密度作半定量分析) 阴性 细菌酶分析 椅旁诊断系统 Perioscan 原理： 判断有无P.g、B.f、T.d及数量 胰蛋白酶样酶 底物BANA 水解 菌斑样本对 BANA的水解能力 检测 椅旁诊断系统 Perioscan(续) 方法 蓝黑色为阳性 浅蓝为弱阳性 无蓝色为阴性 15min Evans 黑色染料 BANA水解产物 椅旁诊断系统 Perioscan(续) 缺点 结果阳性仅提示菌斑中至少有三种菌中的一种，无法确知到底是哪一种 无法进行酶的定量分析 优点 快速、价廉、操作方便 龈沟液生化分析 原理 龈沟液生化分析 GCF是一种炎性渗出物 GCF成分改变可反映局部炎症状况 早期判断病变活动性、预测疾病进展 根据某些GCF成分与病变活动性密切相关，开发了商品化椅旁诊断系统 龈沟液生化分析 诊断 方法 准确判断维持期病人病变活动性及检测疾病的复发 适于预测单个部位还是病人整体的病变活动性 临床应用价值 局限性 龈沟液生化分析 可能成为病变活动性生化指标的GCF成分 炎症介质和产物 宿主产生的各种酶 牙周组织降解产物 炎症介质和产物 PGE2 ——介导牙槽骨吸收的重要炎症介质 GCF中PGE2水平与牙周炎严重程度密切相关--牙周炎病变部位 健康部位 JP患者 AP患者 病变活动期 静止期 治疗后PGE2水平 PGE2很可能成为预测病变进展敏感、特异的指标 炎症介质和产物(续) 细胞因子 IL-1α、 IL-1β、 TNF α、 IL-6和IL-8等 强力调节局部炎症反应 与骨吸收及调节PMN 趋化活性有关 可能成为判断病变 活动性的生化指标 炎症介质和产物(续) 牙周可疑致病菌的特异性抗体 GCF与血浆中抗体水平呈正相关关 系 可用GCF测定抗体滴度 抗体滴度存在显著个体差异 限 制了该检查的临床诊断意义 宿主产生的各种酶 GCF中与病变活动性有关的酶： 中性白细胞弹力酶 (neutrophil elastase, NE) 中性蛋白酶 (neutral proteinase, NP) β –葡萄糖醛酸酶 (β-glucuronidase, β-G) 基质金属蛋白酶 (MMPs) 组织蛋白酶 (cathepsins) 乳酸脱氢酶 髓过氧化物酶 (MPO) 类胰蛋白酶 (tryptase) 碱性磷酸酶 (ALP) 透明质酸酶等 GCF中与病变活动性有关的酶(续)： 宿主产生的各种酶(续) 中性白细胞弹力酶(NE) 来源： 中性白细胞的丝氨酸蛋白水解酶 意义： 病变部位有