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选修三 生物背诵 第一章： 基因工程：是指按照人们的愿望，进行严格的设计，并通过体外DNA重组和转基因等技术，赋予生物衣新的遗传特性，从而创造出更符合人们需要的新的生物类型和生物产品。（由于基因工程是在DNA分子水平上进行设计和施工的，因此又叫做DNA重组技术。） 原理：基因重组 优点：定向改造生物性状 关于限制酶(限制性核酸内切酶——“分子手术刀”)： 分布：主要是从原核生物中分离纯化出来的 特点：能够识别双链DNA分子的某种特定核苷酸序列，并且使每一条链中特定部位的两个核酸之间的磷酸二脂键断开。（简记：特定识别，特定切割。） 作用：切割目的基因、切割质粒。 结果产生两个相同且互补的粘性末端，平末端。 关于连接酶（DNA连接酶——“分子缝合针”）： 分布：一类是从大肠杆菌中分离得到的，称为E·coliDNA连接酶；另一类是从T4噬菌体中分离出来的，称为T4DNA连接酶 作用：连接磷酸二脂键 差别E·cloliDNA连接酶只能将双链DNA片段互补的黏性末端之间连接起来，不能将DNA片段平末端之间进行连接；而T4DNA连接酶既可以“缝合”双链DNA片段互补的粘性末端，又可以“缝合”双链DNA双链DNA片段的平末端，但平末端之间的效率比较低。 问题：DNA连接酶与DNA聚合酶是一回事吗？为什么？ (相同：都为蛋白质；都作用于磷酸二脂键 (不同：DNA连接酶将基因与载体连接，DNA聚合酶是将游离的核苷酸连接起来；DNA连接酶不要模版，DNA聚合酶要模版 关于质粒（基因进入受体细胞的载体——“分子运输车”）： 概念：质粒是一种裸露的、结构简单、独立于细菌拟核DNA之外并具有自我复制能力的很小的双链环状DNA分子。 应具备的特点： (有一个至多个限制酶切割位点，供外源DNA片段（基因）插入其中 (携带外源DNA片段的质粒进入受体细胞后，在细胞中进行自我复制，或整合到染色体DNA上，随染色体DNA进行同步复制 (质粒DNA分子上有特殊的标记基因，供重组DNA的鉴定和选择 小小拓展： ⑴使用载体除质粒以外，还有λ噬菌体的衍生物、动植物病毒等。 ⑵细胞膜上的载体与此载体区别： (本质：细胞膜上的是蛋白质，此载体是DNA (对象：细胞膜上的运输离子、氨基酸等物质，此载体运输DNA 基因工程的基本操作程序：目的基因的获取、基因表达载体的构建、将目的基因导入受体细胞、目的基因的检测与鉴定。 基因文库：将含有某种生物不同基因的许多DNA片段，导入受体菌的群体中储存，各个受体菌分别含有这种生物的不同的基因。 基因组文库：文库中包含了一种生物的所有基因。 部分基因文库：文库中包含了一种生物的部分基因。 PCR技术： 概念、原理：是多聚酶链式反应，是一项在生物体外复制特定DNA片段的核酸合成技术；它利用DNA双链复制的原理（扩增要引物）。 前提：要有一段已知目的基因的核苷酸序列。 程序：目的基因DNA受热变性后解链为单链，引物与单链相应互补序列结合，然后在DNA聚合酶的作用下进行延伸（2n其中n为扩增循环的次数）。 注：如果基因比较小，核苷酸序列又已知，也可以通过DNA合成仪用化学方法直接合成。 小小拓展：PCR技术与细胞DNA复制相同与不同： 相同点：(均需要模板链；(均需要4种脱氧核苷酸；(均需要DNA聚合酶；④均需要引物。 不同点：(PCR技术中的聚合酶耐高温；(PCR技术中DNA高温解旋；(此技术在体外发生。 基因表达载体的构建（基因表达载体的构建是实施基因工程的第二步，也是基因工程的核心）： 需求：目的基因、启动子（是一段有特殊结构的DNA片段，位于基因的首段，它是RNA聚合酶识别和结合的部位，驱动RNA转录）、终止子（位于基因的尾端，也是一段，使转录在所需要的地方停止下来，也是一段有特殊结构的DNA短片段） 小小拓展： 启动子：DNA 启动转录 起始密码：mRNA 启动翻译 终止子：DNA 终止转录 终止密码：mMRNA 中止翻译 将目的基因导入受体细胞（是实施基因工程的第三步）： 转化：在受体细胞内维持稳定和表达的过程。 导入植物细胞： 采用最多的方法：农杆菌转化法 （其它方法：基因枪法、花粉管通道法） 目的基因导入受体细胞——植物细胞（受精卵、体细胞）、动物细胞（受精卵）、微生物细胞。 导入动物细胞： 常用方法：显微注射技术 导入微生物细胞（选择原核生物不能为病毒，病毒无细胞结构，有害菌）： 原核生物具有的特点：繁殖快、多为单细胞、遗传物质相对较少等。 最广泛使用的原核生物：大肠杆菌 转化方法：首先用Ca2+处理细胞，使细胞处于一种能吸收周围环境中DNA分子的生理状态（这种细胞称为感受态细胞），然后将重组表达载体DNA分子溶