动物细胞培养[修改版].pptVIP

 第二章 细胞工程 第一节动物细胞培养 现售猫简搏裸符阳交哲汉潜败蔷雏骤寇制袁柳径八娘咐响瓢验匝姿锐谩烯动物细胞培养动物细胞培养 细胞工程是指应用细胞生物学和分子生物学的原理和方法，通过细胞水平或细胞器水平上的操作，按照人们的意愿来改变细胞内的遗传物质或获得细胞产品的一门综合科学技术。 什么叫细胞工程？ 垛荚吧壮瑶孩涵时拦藕离咱蜕朗呢旅流混胚搅崖拣聂厚惺恋靡四镶兄坝烁动物细胞培养动物细胞培养 1.1细胞培养的概念 是细胞工程中最基础的技术，它是把机体的某一组织或器官取出，分散为单个细胞，使其在人工培养条件下继续生存、生长、甚至增殖的过程。 原理：细胞增殖 捧抢疡涉毡隶搂达对扫捣遇滚憋溢郊失悔鉴苞镶唤齿糟驱劳咱唇斑带秧硬动物细胞培养动物细胞培养 补充合成培养基中缺乏的物质 1.2动物细胞培养的条件： 1.无菌、无毒的环境: 培养液和所有培养用具进行无菌处理 措施：培养液中加抗生素，定期更换培养液 2.营养: 糖、氨基酸、无机盐、微量元素、促生长因子（维生素、激素等）和动物血清 3.温度和PH 36.5±0.5℃ 7.2-7.4 4.气体环境 O2 CO2 (95％空气 5％的CO2) 询科蜗欧培皇肿沿熬跪攫郡筑溶雪袋歇馒寡诈炉辗睫缴蜒匝疲瑶温陵郁朗动物细胞培养动物细胞培养 1.3动物细胞培养出过程 胚胎或幼龄动物的组织器官 细胞悬浮液 10代细胞 50细胞 无限传代 剪碎 胰蛋白酶 洗涤、稀释、分离 原代培养 用胰蛋白酶分散细胞，说明细胞间的物质主要是蛋白质。动物细胞培养适宜的PH为7.2—7.4，此环境下胃蛋白酶（2.0）没有活性，而胰蛋白酶(7.2-8.4)的活性较高。 动物胚胎或幼龄动物的组织、器官，它们细胞增殖能力强，分裂旺盛，分化程度低，容易培养。 动物细胞培养不能最终培养成生物体 动物组织细胞间隙中含有一定量的弹性纤维等蛋白质，将细胞网络起来形成具有一定弹性和韧性的组织和器官。 凭神歹较刊莱援叹杀暇顿狸禾遏朝刚拖刷跋鉴啡等溶耻诗典唱畸择寝退蓝动物细胞培养动物细胞培养 　　细胞株：原代细胞一般传至10代左右细胞生长停滞，大部分细胞衰老死亡，少数细胞存活到40~50代，这种传代细胞为细胞株。 细胞系：细胞株传代至50代后又出现细胞生长停滞状态，只有部分细胞由于遗传物质的改变，使其在培养条件下可以无限制传代，这种传代细胞为细胞系。 细胞株和细胞系的区别： 细胞系的遗传物质改变，具有癌细胞的特点，失去接触抑制，容易传代培养。 竹燎箩化因垫慢奋疽裹跋螺镐窗愚峰蚌络粪饵腰叶钟明墅淮甘柑快锋乾捍动物细胞培养动物细胞培养 原代培养：从机体取出后立即培养的细胞为原代细胞。培养的第1代细胞与传10代以内的细胞称为原代细胞培养。 传代培养：将原代细胞从培养瓶中取出，配制成细胞悬浮液，分装到两个或两个以上的培养瓶中继续培养，称为传代培养。 是驮派玲竟单啥酸共鸣君闹烃九蒙库梯圃轩糠馁邀化邪葱钠煽厌辕岩肠辐动物细胞培养动物细胞培养 短期和临时性的保存可以采用一般的低温，如哺乳动物的细胞在4℃左右可存活几十天甚至几个月。 长期的保存方法目前一般采用超低温冻存法，即将细胞和保护剂放入-196 ℃的液氮中进行保存。 1.4 冷冻和复苏 复苏： 冷冻保存： 随时取出迅速放入37℃温水中解冻 沂肌十一细黎翟辉凡糊轧财象赊打短亏绸杨命啥饶渊坡蛹爵系绑诀鸽牡扶动物细胞培养动物细胞培养 1、生物制品：酶、生长因子、疫苗、单克隆 抗体等 2、有毒物质和药品的检测：将待测物质加入培养液，根据变异细胞占全部细胞的比例来判断该物质的毒性。 3、临床治疗：人工皮肤 4、基础研究：细胞全能性、细胞周期及调控、癌变机理与细胞衰老的研究 1.5 动物细胞培养的应用 锄镜氯搪私解酷勉蓟享墓瞬缘闽肉氯测机汤运啤肺揖冕料露谅款翰挤侦汀动物细胞培养动物细胞培养 1、在动物细胞培养过程中遗传物质发生改变的细胞（　） 　 A．细胞系 B．细胞株 C．原代细胞 D．传代细胞 2、动物细胞工程技术的基础是 ----- （　 ） A.动物细胞融合 B.单克隆抗体　 C.胚胎移植 D.动物细胞培养 A D 3、为了使用于培养的动物组织细胞分散开以便配制成一定浓度的细胞悬浮液，选取来的动物组织应选用下列哪种物质处理（ ） A.胃蛋白酶 B.胰蛋白酶 C.盐酸 D.胰脂肪酶 教学反馈 B 4、用于动物细胞培养的组织和细胞大都取自胚胎或出生不久的幼龄动物的器官或组织，其主要原因是这样的组织细胞 （　 ）　A.容易产生各种变异 B具有更强的全能性　C.取材十分方便 D分裂增殖的能力强 D 养舌吭座纠寡渤钾碗毛阜邹继室班拈翰声