转基因检测国家局培训(基因成分检测)2011-11-24探讨.pptVIP

;主要内容;第一部分 食品中转基因成分检测;一、全球转基因作物种植情况和有关法规介绍;全球转基因作物种植面积（1996-2009）;2 0 0 9年不同国家转基因作物种植面积;1996年到2009年美国转基因作物的种植百分率;巴西、加拿大、中国、印度 转基因作物占作物种植面积的比例;*;*;喷施草甘膦前;中国培育的转基因抗虫水稻Bt63介绍;Bt63;转基因产品标识制度; 2001年5月23日，国务院发布了第304号令《农业转基因生物安全管理条例》;标识的标注方法 转基因动植物（种子、种畜禽、水产苗木）和微生物，直接标注“转基因××”。 转基因农产品的直接加工品,标准为“转基因XX加工品（制成品）”或“加工原料为转基因XX” 用农业转基因生物或用含有农业转基因生物成份的产品加工制成的产品，但最终销售产品中已不再含有或检测不出转基因成分的产品标注为“本产品为转基因XX加工制成， 但本产品中已不再含有转基因成分”或“本产品加工原料中、 有转基因XX，但本产品中已经不再含有转基因成分” ;第一批标识管理的转基因生物（5大类17种）;转基因检测国家标准;二、以核酸为基础的检测方法介绍; 主要内容;1.核酸提取纯化方法;使用标准方法;A 酚-氯仿法提取DNA B PVP法提取DNA （Polyvinylpyrrolidone,聚乙烯吡咯烷酮） C CTAB法提取DNA （Cetyltrimethyle Ammonium Bromide,十六烷基三乙基溴化铵） D 硅土法提取DNA E 胍-氯仿法提取DNA 建议使用商业试剂盒;核酸提取纯化方法;转基因产品的检测策略 Strategy for GMO Detection;GB/T 19495.4-2004 转基因产品检测 核酸定性PCR检测方法 ;主要内容;A.方法简介;A.方法简介;B.检测目标物;3　结构基因特异性检测方法 抗草甘膦大豆、转基因番茄Zeneca?、转基因玉米Bt11、Bt176、T25、转基因马铃薯New Leaf? Plus、New Leaf? Y结构基因特异性检测方法。 4　品系特异性检测方法 转基因玉米MON810、抗草甘膦油菜RT73品系特异性检测方法、棉花MON531、华番一号。 ;C.检测体系;D.结果判定; 一般要求 实验结果不能用“+/－”来表述。 阴性结果不能用“不含GMO”（“GMO not present”）???表述。;阴性结果的表述;测试报告应该包括下列内容： “对于X物种，检测出转基因成分。” 英文表述为： “For species X, the presence of GMO derived material was detected.”;3. 核酸定量PCR检测方法 ;使用标准方法;主要内容;实时荧光PCR方法：在普通PCR基础上引入标记有荧光基团的寡核苷酸探针，可与目的片段结合，在DNA聚合酶的作用下寡核苷酸降解，荧光释放出来。荧光的积累与PCR产物的形成同步，荧光的强度反映了产物生成的量。 通过设置标准物质/分子，绘制出标准曲线，进而可对样品中的目标分子进行定量判断。 优点：1.快速 2.灵敏 3.污染小;实时荧光PCR的原理;扩增曲线：域值和Ct值;EVENT176玉米中CryIA(b)标准曲线;B.检测目标物;试剂名称;转基因产品含量（%）＝;E.结果表述;4.可能产生误差的原因及消除;（1）核酸提取的质量控制 对照的设置： 每个检测样品设置两个提取平行样。 ·提取空白对照：以水代替样品，避免化学试剂污染而影响。 ·提取阴性对照 ·提取阳性对照 DNA检测： 可以通过琼脂糖凝胶电泳来检测DNA的质量； 用核酸蛋白测定仪来测定DNA浓度，但这不是必须的。 要检测内源基因来判断所提取的DNA是否适合PCR扩增。;（2）定性PCR检测的质量控制 PCR检测反应要设置平行实验，两份平行的测试结果应保持一致，否则要重新进行检测。 PCR检测反应要设置试剂空白对照、阳性目标DNA对照、阴性目标DNA对照、提取空白对照。 检测反应完成后，若所有对照结果正常，所检测目标DNA出现扩增，结果判断为阳性，所检测目标DNA未出现扩增，结果判断为阴性。;（3）定量PCR检测的质量控制 标准曲线的质量影响度量的不确定性。标准曲线上每个浓度应做3个平行。 每批测试实验需要设置对照如：空白对照、阳性对照、阴性对照，以及PCR抑制物对照，所有对照的结果中若有一项不符合者，测试结