iTRAQ定量蛋白质组学概念.pptVIP

客户关注的信号通路（pathway） 差异表达蛋白相互作用网络分析 利用MetaCore软件，对所有显著差异表达蛋白进行相互作用网络分析，。相互作用网络分析显示，差异表达蛋白富集到30条经典子网络，右为包含“SP1, TRAP230, Neprilysin, MIF, SLC38A2”等关键节点的子网。 总结 总结：iTRAQ技术及后期分析可以帮助客户很好地验证试验猜想，以及为揭示蛋白表达变化原因提供可靠的方向指引。 高阶（客制化）信息分析 详见信息分析PDF iTRAQ详细实验步骤—ABI试剂盒 iTRAQ详细实验步骤 1：蛋白质提取 可以选择提取蛋白质常用的各种溶液，裂解液里最好不要包括下面试剂，因为这些试剂会干扰iTRAQ试剂的标记反应。 iTRAQ详细实验步骤 2：蛋白质定量 (1) 可以采用Bradford方法及其他方法定量初步 (2) 定量取各组样本的蛋白质进行SDS-APGE电泳，银染定量，根据每个涌道染色情况微调蛋白浓度，保证后续实验中每组样本的蛋白量相同。 iTRAQ详细实验步骤 3：酶切，标记 每组样本（各100μg）分别加入-20℃预冷的丙酮（丙酮：样品体积比=6：1），颠倒混匀，-20℃沉淀30min~4h（根据样品所需沉淀量选择时间，一般开始时可选1小时）； 12000rpm 离心15分钟，弃上清，用试剂盒中自带的溶解液disso