血涂片染色及白细胞分类计数讲述.ppt

* * 临床检验基础实验六 血涂片染色 白细胞分类计数 1.瑞氏染色 1.1试剂成分： 伊红——酸性——嗜碱性染料 亚甲蓝（美蓝）——碱性——嗜酸性染料 甲醇——固定 溶剂 磷酸缓冲液（pH: 6.4-6.8） 1.2着色原理： 化学亲和作用+物理的吸附作用 伊红+细胞中的碱性物质——红色 亚甲蓝+酸性物质——蓝色 中性物质+伊红和亚甲蓝——淡紫色 1.3 pH对细胞染色影响 pH过低 PI 正电荷增多——易与伊红结合——偏红 pH过高PI 负电荷增多——易与亚甲蓝结合——偏蓝 最适环境：弱酸（pH6.4-6.8） 血涂片： 淡紫红色 镜 下： 成熟红细胞——粉红色 白细胞——胞质 呈现其特有的色彩 细胞核 紫红色 染色质结构清楚 判别方法 染色偏酸: 红细胞、嗜酸粒细胞颗粒偏红 白细胞核 淡紫红色或不着色 染色偏碱： 红细胞 灰蓝色 中性粒细胞颗粒 深暗、偏粗，紫黑色 嗜酸性粒细胞 暗褐色或紫黑色、蓝色 1.4器材 载玻片、推玻片、洗耳球 1.5试剂 瑞氏染液（商品） I液：瑞特染料、纯甲醇、甘油 I液：磷酸盐缓冲液（KH2PO4 Na2HPO4） 1.6 操作 制备血涂片（待完全晾干） 加I液数滴覆盖整个血膜 0.5-1min 滴加等量或稍多的II液（洗耳球混匀） 5-10min 冲洗（注意） 干燥 注意事项 1.血涂片干后方可染色 2.加染液不能过少 3.冲洗时应以流水冲洗 4.染色过淡可复染，先加缓冲液再加染液 5.染色过深可用水冲洗或浸泡一定时间，也可用甲醇脱色 6.染色时间与染液浓度、室温及细胞多少有关。应在具体实践中摸索合适的时间。 　　　　　　　 2.WBC分类计数 2.1原理 2.2器材:显微镜、香柏油、拭镜纸、清洁剂 2.3操作步骤 1.采末梢血——染色 2.低倍镜下选择细胞分布均匀、着色良好的域， 滴香柏油一滴 3.油镜下分类，分类时要有秩序的连续进行（“几” 字形），避免主观选择视野。通常分类100个白细胞，计 数并报告各种白细胞所占百分比。 4.计算 5.报告方式：XX细胞：XX% 2.4 外周血正常白细胞形态特征: 中性粒细胞：杆+分 10-15 μm 圆形 胞质粉红 胞质内颗粒量多、细小、均匀、紫红色 核弯曲呈杆、带状 染色质粗糙，紫红色 分叶核：核分2-5叶 13-15 μm 圆形 胞质着色不清 胞质内颗粒粗大、整齐、均匀、充满胞质、桔红色 核多分2叶 染色质粗糙，紫红色 嗜酸性粒细胞+淋巴细胞 *