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培养基的质量控制及应用Introduction and Quality Control of Dehydrated Media 内 容 提 要 培养基的简介 质控菌株 干粉培养基的质量控制 干粉培养基使用常见问题 培养基的简介 ★培养基的定义 ★培养基的组成 ★培养基的分类 培养基定义 培养基是按照微生物生长繁殖或积累代谢产物所需要的各种营养物质，由人工配制而成的营养基质，专供微生物培养、分离鉴别、研究和保存用。 培养基的组成 为满足微生物生长和代谢的需要，培养基一般包含碳源、氮源、水、无机盐、能源和生长因子六大类营养物质。 培养基分类——组成成分 ◆天然培养基：由化学成分不完全明了的天然物质组成。（很难保证稳定性） ◆半合成培养基：由不明化学成分的天然物质和已知化学成分的物质组成。 ◆合成培养基：由已知化学成分的物质组成。（可以做到稳定性一致） 培养基分类——物理状态 液体培养基——不含凝固剂，利于菌体的快速繁殖、代谢和积累产物。 流体培养基——含0.05-0.07%琼脂粉，增强培养基的黏度，可降低空气中的氧气进入培养基的速度，使培养基保持长时间的厌氧条件，有利于一般厌氧菌的生长繁殖。 半固体培养基——含0.2-0.8%琼脂粉，多用于细菌的动力观察、菌种传代保存及贮运细菌标本材料等。 固体培养基——含1.5-2%琼脂，多用于细菌的分离、鉴定、菌种保存及细菌疫苗制备等方面。 培养基分类——功能 基础培养基——含有适合大多数微生物生长需要的营养物质。 选择性培养基——含有目标菌生长需要的特殊营养物质，及抑制非目标菌生长的抑制剂。 ◆增殖培养基-液体 ◆分离培养基-固体 鉴别培养基——通过指示剂或指示剂和抑菌剂的共同作用,鉴定某种微生物。 使用方便 培养基分类——制备工艺 ★自行配制——成本相对较低，但繁琐，质量不稳定。 ★“Ready-to-Use”——使用方便，但保质期短，运输不便。 ★干燥培养基——使用方便，质量稳定，易保存，推广空间广阔。 ※国外：Oxoid, Difco, Merck等 ※国内：陆桥等 使用方便 质控菌株 保存与活化 菌悬液制备 几点使用说明 ISO 11133：2003 Part-1 Reference Strain Reference Stock Working Culture 保存与活化1 Reference strain (冻干菌种） 转种活化 Reference stock （冰箱保存的第一代培养物-80℃） 转种活化 Working culture （用于培养基微生物质控的新鲜培养物） 保存与活化2 ?一般长期保存方式 液氮保存：液氮低温保存，长达10年以上时间 冻干保存：加保护剂(脱脂奶粉)制成真空冻干粉, 一般10年左右 甘油保存：15~20%甘油作保护剂,低温( -80℃)保存, 一般2~3年 ?一般短期保存方式 半固体穿刺：4℃冰箱保存半固体培养物 斜面保存：4℃冰箱保存斜面培养物 菌种保存的原则 根据微生物生理、生化特点，人工创造条件，主要是低温、干燥、缺氧三者，使微生物的代谢处于不活泼、生长繁殖受抑制的休眠状态，以达到保持纯种优良性状的目的。 保存与活化3 菌种活化 一般冻干菌种活化 接种营养型液体培养基(NB/TSB/BHI/TSB-YE)进行培养活化; 一般工作菌种活化 除采用上述营养液体培养基外，还可转接固体、半固体、斜面等营养型培养基进行培养活化。 菌悬液的制备 比浊 麦氏比浊仪:挑取纯的单菌落用无菌生理盐水悬置，麦氏浊度仪透光比浊，制备0.5MFC（相当于108CFU/ml)。 标准比浊管：BaSO4混浊液，使用前振摇比浊管，使悬浊液分散均匀。 估算浊度 　一般细菌在TSB中培养4~5h，菌悬液浓度大致相当于107-108CFU/ml。 几点使用说明1 菌种来源：从菌种保藏中心购置（中国微生物菌种保藏中心） 菌种质控的常规检验：纯度、同源性、形态特征 只有质控合格的菌种才能用于实验室保存株（Reference Stock）的制备 实验室必须设立专门地方用于菌种保存，必须严格遵照实验室制定的安全使用的有关规定及防护措施 几点