限制和修饰系统LlaBIII在构建抗噬菌体菌株中的作用.pdfVIP

! 卷 期 ## 年 ! 月 微 生 物 学 报 !#$ %’()(*(+$ ,-$ $%’! ()*+ ,%’ !!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!! ## 作者简介：孔 健（ -./! 0 ），女，山东菏泽人，山东大学微生物技术国家重点实验室副教授，博士，主要从事乳酸菌 应用基础性研究。 收稿日期： ##-1--1#/ ，修回日期： ##-1-1-. 限制和修饰系统 .*$! 在构建抗噬菌体菌株中的作用 孔 健- 23445 2%65)7658 马桂荣- （- 山东大学微生物技术国家重点实验室 济南 9#-## ） （ 丹麦皇家畜牧农业大学乳制品和食品科学系 丹麦） 关键词：乳酸乳球菌，噬菌体，限制和修饰系统，乳制品发酵 中图分类号： :.;; 文献标识码： ( 文章编号： ###-1/#. （ ## ） #1#!/1#9 限制和修饰（ *564*+4+%8 =8 ?%+@+=4+%8 ， ABC ）系统是指由限制性内切酶和甲基化酶组成的单亚基或 多亚基复合酶系统，两者通常成对出现，具有相同的 D,( 识别位点，其作用相反。 ABC 系统在原核生物 中普遍存在，在保护细胞免遭外源病毒侵害方面具有重要作用［-］。 作为发酵剂的乳酸乳球菌在乳制品发酵中具有重要作用，但这类菌株极易遭受噬菌体感染，导致菌 株产酸力降低，甚至发酵失败，造成严重的经济损失。所以在乳制品发酵过程中防止噬菌体感染就成为 十分重要的问题。 通过自然筛选或诱变处理等手段筛选噬菌体不敏感突变株以及利用基因克隆技术构建抗噬菌株菌 株在发酵过程中起到了良好的抗噬菌体感染效果［，;］。质粒 )2E9// 分离于乳酪发酵剂乳酸乳球菌 （ !#$%#%##’ (#$)’ 6FG6)’ #*+,%*)’ ） E9/ ［ ! ］，发现携带有一种新的编码限制和修饰（ ABC ）系统的基因 !(HI1 II ［ 9 ］（ J58H=8K 注册号为 (L;!M#M- ），本文通过电转化方法将 ABC 系统 !(HIII 导入到不同的乳酸乳球菌 中，分析含有 ABC 系统 !(HIII 的工程菌株对噬菌体的抗性。 # 材料和方法 #$# 菌株、噬菌体和培养基 -N-N- 菌株和噬菌体：本实验所有菌株和噬菌体列表于 - 。 -N-N 培养基：乳酸乳球菌培养基（ JC-M ）为 C-M 培养基（ D+@% ），加 #N9O 葡萄糖；转化培养基（ PJC-M ） 为 C-M 培养基，加 -O 葡萄糖， N9??%BQ CRS ， N9??%BQ S=S ， 9 ! RB?Q 氯霉素；噬菌体感染培养基为 JC-M 培养基加 9??%BQ S=S 。 #$% 质粒 ’( 的提取 ! ’ !#$)’ 培养到指数生长期，离心收集菌体。菌体细胞用 -#?RB?Q 溶菌酶 ;MT 酶解 #?+8 ，用 JI(1 JU, )=6?+ C+8+1)*5) K+4 （ S7=46V%*47 ， WP( ），按照实验说明提取质粒 D,( 。 #$) 噬菌体效价（ *++,-,*.-/ 0+ 1234,.5 ， 678 ）的测定 噬菌体在抗性菌株中的噬菌斑数与在敏感菌株中的噬菌斑数之比，敏感菌株的 UXY 为 - 。噬菌斑 的测定采用双层平板法。 #$9 电转化 参见 Z%% 和 ,56 的方法［/］。电穿孔仪为 J585 YF65* （ H+%A= 公司产品），脉冲参数 -N9K$B?? ， 9 ! L 和 ## 。 表 ! 实验所用菌株和噬菌体 菌株和噬菌体 相关特性 来源 ! ! #$%’ #$ %’()*+,-. )*+-, /,*0 1(.*,2.3 2.-)1,’) ［ 44 ］ 564$47 8.-)1,’9:+33 ， 0;)* :;+ =$ -’ ? )23,3) ［ 4? ］ %@47A= BC23 % DE5 )C)*31 0+;1;);1-. .;-*3’ ， 0;)* :;+ F.@$G ， F%@ $$ ， F%@4GA ［ 4= ］ H-*3+,;20-I3) )J4 K1-.. ， ,);13*+,903-’3’ =$ )23,3) ［ 47 ］ 2? K1-.. ， ,);13*+,903-’3’ =$ )23,3) LF*-,3’ :+;1 B D M.-30-113+ NN#A K1-.. ， ,);13*+,903-’3’ =$ )23,3) LF*-,3’ :+;1 O O;)320)3 ? 8+;.-*3903-’3’ ， ? )23,3) LF*-,3’ :+;1 B D M.-30-113+ (.=$ K1-.. ， ,);13*+,903-’3’ 8==# )23,3) ［ 4# ］