2017级选修三1.1DNA重组技术的基本工具汇编.ppt

选修3 基因工程的产物 普通棉花(无抗虫基因) 苏云金芽孢杆菌 提取 抗虫基因 与运载体DNA拼接 导入 棉花细胞(含抗虫基因) 转基因棉花植株 抗虫基因表达 操作水平： 原理： 操作环境： 目的: DNA分子水平 基因重组 生物体外 定向地改造生物的遗传性状 基因工程的概念 基因工程：是指按照人们的愿望,进行严格的设计，并通过体外DNA重组和转基因等技术，赋予生物以新的遗传特性,从而创造出更符合人们需要的新的生物类型和生物产品。由于基因工程是在DNA分子水平上进行设计和施工的，因此又叫作DNA重组技术。 基因工程得以实现的基础理论是什么？ 培育抗虫棉的操作过程中用到了哪些工具？ 基因工程得以实现的基础理论是什么？ 有细胞结构的生物均以DNA作为遗传物质，且其基本结构相同。 各种生物表达基因共用一套遗传密码子 （一）“分子手术刀” １、分布： 主要在原核生物中 特异性，即识别特定的核苷酸序列， 切割特定切点。 大肠杆菌中的一种限制酶（EcoRⅠ）能专一识别GAATTC序列，并在G和A之间切开。 ——限制性核酸内切酶 二、DNA重组技术的基本工具 3、举例： ２、作用特点： 限制酶（EcoRⅠ）的作用过程 5、切割的具体部位是什么? 磷酸二酯键 ４、结果： 产生黏性未端和平末端 什么叫黏性末端？ 被限制酶切开的DNA两条单链的切口，带有几个伸出的核苷酸，它们之间正好互补配对，这样的切口叫黏性末端。 思考? 推测限制酶存在于原核生物中的作用？ 切割外源DNA,使之失效，从而达到自我保护的目的。 为什么限制酶不剪切原核生物本身的DNA? 限制酶 HindⅢ只能识别序列AAGCTT,并且只能在A与A之间切割。若在目的基因的两侧各有一个HindⅢ的切点，请画出目的基因两侧被限制酶 HindⅢ切割后所形成的黏性末端。 要想获得某个特定性状的基因必须要用限制酶切几个切口？可产生几个黏性(平)末端？ 要想获得某个特定性状的基因必须要用限制酶切几个切口？可产生几个黏性(平)末端？ 要切两个切口，产生四个黏性(平)末端。 如果把两种来源不同的DNA用同一种限制酶来切割，会怎样呢？ 会产生相同的黏性(平)末端 思考? ……GAATTC…… ……CTTAAG…… ……GAATTC…… ……CTTAAG…… EcoRⅠ ……GAATTC…… ……CTTAAG…… ……GAATTC…… ……CTTAAG…… 不同来源的DNA片段混合 将不同种来源的DNA片段连接起来 生物A基因片段 生物B基因片段 ……G　　AATTC…… ……CTTAA　　G…… ……G　　AATTC…… ……CTTAA　　G…… 酶切 用两种不同的限制酶来切割DNA，产生的黏性末端可能相同吗？ ……GAATTC…… ……CTTAAG…… ……AAATTT…… ……TTTAAA…… （二）“分子缝合针” ——DNA连接酶 将DNA双链上的两个缺口同时连接起来。 连接的是什么化学键? 磷酸二酯键 （二）“分子缝合针” ——DNA连接酶 作用： 类型 E·coli DNA连接酶 T4 DNA连接酶 来源 功能 大肠杆菌 T4噬菌体 只能连接黏性末端 能连接黏性末端和 平末端 （二）“分子缝合针” ——DNA连接酶 阅读课本P5自主归纳以下内容: 　 T4DNA连接酶 DNA连接酶与DNA聚合酶是一回事吗?为什么? 回顾DNA聚合酶的作用 以一条DNA链为模板，将单个脱氧核苷酸通过磷酸二酯键形成一条与模板链互补的DNA链。 （三）分子运输车—基因进入受体细胞的载体 作用：将外源基因送入受体细胞。 能复制，并带着插入的目的基因一起复制 有标记基因 有切割位点 本质：能自我复制的小型双链环状DNA。 2、认识常用的载体——质粒 想一想，具备什么条件才能充当“分子运输车”？ 3、基因工程使用的载体： 质粒 λ噬菌体的衍生物， 动植物病毒等 1、 下图为DNA分子在不同酶的作用下所发生的变化,图中依次表示限制酶、DNA聚合酶、DNA连接酶、解旋酶作用的正确顺序是(　　) A.①②③④ B.①②④③ C.①④②③ D.①④③② C 2、pBR322质粒是较早构建的质粒载体,其主要结构如图一所示。 (1)为了检测重组质粒是否导入原本无ampR和tetR的大肠杆菌,将大肠杆菌在含氨苄青霉素的培养基上培养,得到如图二的菌落。将灭菌绒布按到图二培养基上,使绒布面沾上菌落,然后将绒布按到含四环素的培养基上培养,得