原创力文档ProtocolofthePolymeraseChainReactionforDetectingGeneticallyModifiedComponentsinPotatoes.docVIP
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ProtocolofthePolymeraseChainReactionforDetectingGeneticallyModifiedComponentsinPotatoes
SN Number:
SN/T 1198-2003
Title:
Protocol of the Polymerase Chain Reaction for Detecting Genetically Modified Components in Potatoes
Target:
GM or Non-GM potato
Scope:
GM potato line: (NEW LEAFS)P OTATO LINES BT-O6,A TBT 04-06, ATBT 04-31，ATBT 04-36 AND SPBT 02-05;(NEW LEAFS PLUS) POTATO LINES PBMT 21-129,PBMT 21-350A ND PBMT 22-82;(N EW LEAFSY )P OTATO LINESR BMT 15-101, SEMT 15-02 AND SEMT 15-15, and the derived foodstuffs such as : potato tuber, potato plant, crude potato strip, crude potato chip, and potato starch.
Primer pairs and product length:
Target sequencesPrimerProduct length (bp)InstructionPATA gene5-tga cct gga cac cac agt tat-3216Indogenous reference5-gtg gat ttc agg agt tct tcg-3CaMV35S promoter5-get cct aca aat gcc atc a-3195Screening: NEW LEAFS5-gat agt ggg att gtg cgt ca-3FMV 35S5-agt cca aag cct caa caa ggt c-3365Screening: NEW LEAFS PLUS, NEW LEAF. Y5-cat tag tga gtg ggc tgt cag g-3NOS5-gaa tcc tgt tgc cgg tct tg-3180Screening: NEW LEAFS PLUS; NEW LEAFS Y; NEW LEAFS5-tta tcc tag ttt gcg cgc to-3NPTII5-gga tct cct gtc atc t-3173Screening: NEW LEAFS PLUS; NEW LEAF@ Y; NEW LEAFS5-gat cat cct gat cga c-3PLRVrep5-tcg tca tta aac ttg acg ac-3172NEW LEAFS PLUS5-ctt ctt tca cgg agt tcc ag-3PVYcp5-gaa tca agg cta tca cgt cc-3161NEW LEAFS Y5-cat ccg cac tgc ctc ata c,3Cry 3 A5-aga gcc gtc gca aac act aat c-3112Screening: NEW LEAPS PLUS; NEW LEAFS Y; NEW LEAFS5-tct ggg tgc tgg cct cat cg-3
PCR Reaction Mixture:
RegentVolume (μl)10 X PCR buffer2.54 X dNTP(2.5 mmol/L)2.0Forward Primer (20 pmol/μL)0. 5Reverse Primer (20 pmol/μL)0. 5Taq DNA polymerase(5 IU/μL)0. 2UNG (1 IU//μL)0. 2MgCl2 (25 mmol/L)2.0DNA template (20 ng/μL)1ddH2OUp to 25μL
Temperature-time program:
TargetPre-denatureamplificationcycleProlongationPA TA94 ℃,3 min94 ℃, 40 s; 50 ℃, 45s; 72 ℃, 45s3572 ℃, 7 minCaMV 35S;
NOS; NPTII94 ℃,3 min94 ℃, 40 s; 54 ℃, 45s; 72 ℃, 45
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