液相色谱常见问题及处理方法(LC-MS)教材.pptVIP

液相色谱常见问题及处理方法(LC-MS)教材.ppt

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1. 高效液相色谱分析方法的建立 2. 高效液相色谱仪常见问题及处理方法 3. 制备型高效液相色谱技术 4. 高效液相色谱-质谱联用技术(HPLC-MS);高效液相色谱仪常见问题 及处理方法;吸滤头;材料:不锈钢烧结,孔径10μm 故障:堵塞 表现:管路中不断有气泡生成 措施:用5%~20%的稀硝酸,超声波清洗, 再用蒸馏水清洗 注意点:吸滤头拆下时不得将塑料管剪断;二、高压泵;单向阀结构;故障1:宝石球粘附于垫片 表现:泵无法吸液或排液,流路不通,柱压低或没有。 措施:1)用针筒抽单向阀的出口以产生负压, 使宝石球与垫片分开 2)拆下单向阀,放入异丙醇或水中, 用超声波清洗;故障:密封圈磨损而导致 密封不良 现象:系统压力波动大或 漏夜 措施:更换密封圈 注意点:更换密封圈拆卸泵头前,柱塞杆复位 (P-SET);三、手动进样阀;1. 构造及使用原理;故障1:转子密封损坏 现象:漏液 原因: a 拧的太紧 b 样品太脏(过滤不充分) c 针头损坏或未使用液相色谱专用注射器 解决措施:更换转子密封,并在使用时注意保养。 故障2:载样困难 原因: 定量环堵塞 解决措施:清洗或更换定量环 ;样品过滤:;故障:系统压力过高、峰型变差(拖尾峰、前沿峰、分叉峰),保留时间改变等。 解决措施:清洗、填补、更换 正相柱清洗溶剂: 正庚烷、氯仿、乙酸乙酯、丙酮、乙醇等 反相柱清洗溶剂:: 甲醇、乙腈、氯仿、异丙醇、0.05mol/L稀硫酸 注意:应排除操作不当引起的假象。;色谱柱的维护;肩峰或分叉峰产生的原因:;柱的补修;恢复实例;1. 更换氘灯(紫外检测器);1. 溶剂的过滤 滤膜类型: 聚四氟乙烯滤膜: 适用于所有溶剂,酸和盐。 醋酸纤维滤膜: 不适用于有机溶剂,特别适用于水基溶剂。 尼龙66滤膜: 适用于绝大多数有机溶剂和水溶液,可以用于强酸,不适用于二甲基甲酰胺。 再生纤维素滤膜: 蛋白吸收低,适用于水溶性样品和有机溶剂。;1)泵中气泡使液流波动,改变保留时间和峰面积; 2)柱中??泡使流动相绕流,峰变形; 3)气泡过多可使泵压力不稳甚至停止工作; 4)检测器中的气泡产生基线波动, ① 示差折光检测器——使折射率变化 ② UV检测器(200nm以下)——溶解氧气有吸收 ③ 荧光检测器——溶解氧气有荧光猝灭作用 ;氟树脂膜;3. 缓冲液

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