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第  PAGE 4 页 共  NUMPAGES 4 页 2012年高考生物[选修三 40、根据基因工程的有关知识，回答下列问题： （1）限制性内切酶切割ＤＮＡ分子后产生的片段，其末端类型有　　　和　　　。 （2）质粒运载体用EcoRⅠ切割后产生的片段如下： 为使运载体与目的基因相连，含有目的基因的DNA除可用EcoRⅠ切割外，还可用另一种限制性内切酶切割，该酶必须具有的特点是　　　。[来源:z#zs#] （3）按其来源不同，基因工程中所使用的DNA连接酶有两类，即　　　　　DNA连接酶和　　　　　　　DNA连接酶。 （4）反转录作用的模板是　　　，产物是　　　。若要在体外获得大量反转录产物，常采用　　　技术。 （5）基因工程中除质粒外，　　　　　和　　　　　　也可作为运载体。[来源:] （6）若用重组质粒转化大肠杆菌，一般情况下，不能直接用未处理的大肠杆菌作为受体细胞，原因是　　　　　　　。 2012年普通高等学校招生全国统一考试（安徽卷）生物 （5）利用转基因猪乳腺生物反应器可生产F8。要使乳腺细胞合成F8，构建表达载体时，必须将F8基因cDNA与猪乳腺蛋白基因的 等调控组件重组在一起。F8基因cDNA可通过克隆筛选获得，该cDNA比染色体上的F8基因短，原因是该cDNA没有 。 （6）为获得更多的转基因母猪，可以采用体细胞克隆技术，将纯合转基因母猪的体细胞核注入 ，构成重组胚胎进行繁殖。 【答案】 （5）启动子 内含子 （6）去核的卵母细胞 2012年普通高等学校招生全国统一考试（福建卷）生物 32．现代生物科技专题 肺细胞中的let-7基因表达减弱，癌基因RAS表达增强，会引发肺癌。研究人员利用基因工程技术将let-7基因导入肺癌细胞实验表达，发现肺癌细胞的增殖受到抑制。该基因工程技术基本流程如图１。 请回答： （１）进行过程①时，需用 酶切开载体以插入let-7基因。载体应用RNA聚合酶识别和结合的部位，以驱动let-7基因转录，该部位称为 。 （２）进行过程②时，需用 酶处理贴附在培养皿壁上的细胞，以利于传代培养。 （３）研究发现，let-7基因能影响RAS的表达，其影响机理如图２。据图分析，可从细胞提取 进行分子杂交，以直接检测let-7基因是否转录。肺癌细胞增殖受到抑制，可能是由于细胞中 （RASmRNA/RAS蛋白）含量减少引起的。 2012年普通高等学校招生全国统一考试（广东卷）生物 2．培育草莓脱毒苗所采用的主要技术是 A．组织培养 B．细胞杂交 C．显微注射 D．核移植 【答案】Ａ 【解析】草莓植株分生区细胞不含病毒或含病毒的量少，可以利用茎尖（或根尖）经植物组织培养技术培养出脱毒幼苗。 （3）水稻Y基因发生突变，也出现了类似的“常绿”突变植株y2，其叶片衰老后仍为绿色。为验证水稻Y基因的功能，设计了以下实验，请完善。 Ⅰ．植株甲：用含有空载体的农杆菌感染________的细胞，培育并获得纯合植株。 Ⅱ．植株乙：________，培育并获得含有目的基因的纯合植株。 （二）预测转基因植株的表现型： 植株甲：________维持“常绿”；植株乙：________。 （三）推测结论：________。 2012年普通高等学校招生全国统一考试（江苏卷）生物 32.（9分）图1表示含有目的基因D的DNA片段长度（bp即碱基对）和部分碱基序列，图2表示一种质粒的结构和部分碱基序列。现有Msp I、BamH I、Mbo I、Sma I4种限制性核酸内切酶，它们识别的碱基序列和酶切位点分别为C↓CGG、G↓GATCC、↓GATC、CCC↓GGG。请回答下列问题 (1)图1的一条脱氧核苷酸链中相邻两个碱基之间依次由 连接。 (2)若用限制酶SmaI完全切割图1中DNA片段，产生的末端是 末端，其产物长度为 。 (3)若图1中虚线方框内的碱基对被T-A碱基对替换，那么基因D就突变为基因d。从杂合子中分离出图1及其对应的DNA片段，用限制酶Sma I完全切割，产物中共有 种不同长度的DNA片段。 (4)若将图2中质粒和目的基因D通过同种限制酶处理后进行连接，形成重组质粒，那么应选用的限制酶是 。在导入重组质粒后，为了筛选出含重组质粒的大肠杆菌，一般需要用添加 的培养基进行培养。经检测，部分含有重组质粒的大肠杆菌菌株中目的基因D不能正确表达，其最可能的原因是 。 2012年普通高等学校招生全国统一考试（山东卷）生物 35、（8分）【生物—现代生物科