第10章生化(刘建华)题材.ppt

Biochemistry Sixth Edition;如同机动车交通，用信号调节代谢途径流动效率更高。CTP是一个多步骤反应的最终产物。CTP抑制限速步骤催化酶（即天冬氨酸-氨基甲酰转移酶ATCase）活性能够控制这个代谢途径。;酶活性的调节方式主要有五种。 变构控制。变构蛋白质含有调节位点和多个活性位点。信号小分子与调节位点结合,控制酶蛋白活性。变构蛋白有协同性：一个活性位点的活性影响其它活性位点。因此有变构蛋白能够将信号分子或同一酶蛋白活性位点的信息传递给蛋白质，调节酶蛋白活性。 酶的多重形式。同功酶（isozyme，isoenzyme）是在不同位置或时间调节酶活性的另一种形式。同功酶是同一生物体内存在的催化同一反应的同源酶，它们之间在结构上稍有差异，但是催化反应的Km和Vmax，以及调节特性差异显著。通常同功酶随表达的时间、地点和发育状态而改变。 可逆共价修饰。有很多酶共价连接一个基团后催化活性显著改变，最常见的修饰基团是磷酸。ATP是磷酸供体，催化的酶是蛋白激酶。蛋白磷酸酯酶负责删除蛋白质的磷酸基团。;蛋白裂解活化。有些调节使酶蛋白活性能够来回变化，使之处于有活性和无活性两种状态。还有一种调节方式是酶蛋白活性不可逆转地激活。只要水解少数几个肽键甚至一个肽键就能够酶激活的蛋白质称为酶原(zymogen, or proenzyme)。这种机制能够产生消化酶如胰凝乳蛋白酶、胰蛋白酶、和胃蛋白酶。血液凝固就是酶原激活的级联反应。特异抑制蛋白与分子靶标不可逆结合关闭凝血过程。 酶量控制。调节酶量也是调节酶活性的一种方法。通常在转录水平进行这种调节。在31章我们将介绍这种调节模式。;图10.1 ATCase酶促反应。ATCase催化嘧啶合成途经的限速反应，天冬氨酸与胺酰基磷酸的缩合生成N-氨甲酰天冬氨酸。;天冬氨酸-氨基甲酰转移酶是一种变构调节酶，受该途径终端产物抑制 ;图10.3 ATCase酶促反应动力学呈S曲线。天冬氨酸-氨基甲酰转移酶催化反应得产物形成速度对底物Asp浓度作图呈S型曲线，表明一个活性位点结合底物能够增加这个酶蛋白分子其它位点的活性。因此这个酶是正协同酶。;ATCase含有独立的催化亚基和调节亚基。;图10.5 超离心研究ATCase酶。天然ATCase （A）和经过p-羟基汞苯甲酸处理的ATCase的沉降速度显示酶蛋白可以分成催化亚基( c) 和调节亚基 ( r )。; 较大的亚基称为催化亚基。这个亚基有催化活性，但是不受CTP调节，其催化动力学也不呈S曲线。较小的亚基能够结合CTP，但是没有催化活性，称为调节亚基。催化亚基有三条多肽链，称为c3 (每条多肽链有34 kD)。调节亚基有两条多肽链，称为r2 (每条多肽链有17 kD)。将催化亚基和调节亚基混合，两者能迅速结合成与天然ATCase一样的c6r6 （即两个催化亚基和三个调节亚基结合而成的复合物）。 2 c3 + 3 r2 === c6r6 重组酶的催化动力学性质和变构调节性质与天然酶完全相同。因此，ATCase有独立的调节亚基和催化亚基。天然酶分子中催化亚基与调节亚基之间相互作用产生了酶促特性和变构调节特性。; 亚基之间究竟是什么作用能够解释ATCase的特性？大量的思路来自ATCase的三维结构测定。William Lipscomb实验室首先用x-晶体衍射测定ATCase结构。两个催化三体叠加在一起，三体之间用调解多肽链联系起来（图10.6）。催化亚基和调节亚基之间有大量接触：调节亚基（二聚体）的每条r链与催化三体的一条c链相互作用。一个Zn 2+与四个半胱氨酸残基结合稳定c链与r链的一个结构域接触。汞化合物p-羟基汞苯甲酸与半胱氨酸结合力强，替代Zn 2+导致r-链结构域不稳定，结果催化亚基和调节亚基发生解离。;图10.6 ATCase结构。（A）从顶部观察天冬氨酸-氨基甲酰转移酶的四级结构。中间图仅仅代表亚基之间的关系。只能看到一个催化三体（黄色）的c链，另一个催化亚基（三体）被遮住。一个r链经过Zn 2+离子与一个c链相互作用。（B）ATCase侧视图。; 为了确定活性位点，在N-膦酰乙酰基-L-天冬氨酸（PALA）存在的情况下进行ATCase结晶。PALA是双底物类似物，类似于催化途径的中间物（图10.7）。;双底物类似物;ATCase-PALA复合物结构显示，PALA结合于催化亚基三聚体两个相邻的c链之间。;PALA与ATCase结合导致酶四级结构变化显著。两个催化三聚体亚基之间疏远了12A，旋转了10o。相应地，调节亚基叶旋转了15o以适应之。因此PALA与ATCase结合导致美蛋白分子膨大。;图10.10 S型曲线的基础。将变构酶想象成