项目SOD的生产操作过程.docVIP

项目二 超氧化物歧化酶（SOD）的生产 实训过程图 第1组 组员：王倩茹、姜若琳、毕琳琳、仲崇江、孙博文 任务2：SOD的提取与纯化 取新鲜蒜瓣 去皮 称取10g 研磨破碎细胞 加0.05mol/L磷酸缓冲液 pH为7.8，30ml 研磨20min 研磨后 将研磨液倒入离心管 6000r/min(下同)离心15min 离心后，弃沉淀留上清 取出1ml，标记为SOD提取液 加1/4体积氯仿乙醇 搅拌15min后,离心10min 取出1ml，标记为SOD粗酶液；剩余上清液，分为两等分 （1）盐析法： 称取固体硫酸铵6.36g 研磨成细小颗粒 边搅拌边加入到一份粗酶液中 搅拌15min 离心15min 取沉淀，加入10ml磷酸缓冲液 取出1ml，标记为酶液1 （2）有机溶剂沉淀法： 移取等体积的冷丙酮 加入到另一份粗酶液中 低温搅拌15min 离心15min 取沉淀，加入10ml磷酸缓冲液 取出1ml，标记为酶液2 结果展示 任务3：SOD活力的测定 1、SOD活力测定 从上组4支比色管中取出0.1ml样品液 放入4支样品比色管中，加入蒸馏水1.7ml 做空白管与对照管，分别加入蒸馏水2ml与1.8ml 向各比色管中分别加入pH8.3磷酸缓冲液3ml 各比色管水浴加热25℃，放置25min 向对照管与样品管中分别加入邻苯三酚0.2ml，迅速混匀 4min后加一滴浓HCl（0.01mol/L）,停止反应 颜色显示 紫外可见光分光光度法测量420nm处吸光值 2、蛋白质含量测定 从原比色管中分别取出0.9ml 放入4支样品比色管中 分别稀释30、20、10、10倍 所得 分别使用紫外分光光度计在260nm和280nm处测量吸光值