学科信息动态·生物学专辑南昌大学图书馆2010-01检索范围中国学术.doc

检索范围：中国学术期刊 维普期刊数据库 万方数据库 研究方向：生物学（） 时间限制：200.04 – 2010.01 检索结果： 青蒿素代谢途径中两个关键酶基因的克隆及黄花蒿遗传转化研究青花菜硒甲基转移酶(SMT)基因克隆及超表达研究硒甲基转移酶(SMT)能将硒代半胱氨酸特异性的甲基化成为非蛋白质氨基酸-硒甲基硒代半胱氨酸，并且在植物高效的抵抗硒毒性影响中起关键作用。因为硒与硫具有相似的化学特征和相同的代谢途径，所以硒与硫存在竞争抑制并且其相应代谢产物之间存在互作关系，青花菜既具有富含含硫化合物特性，同时也具有富硒特性，其重要活性成分-萝卜硫素(Sulforaphane)是由含硫氨基酸(甲硫氨酸)合成而来，由于硒在代谢过程中取代了硫的位置，硒代谢途径产生的硒甲硫氨酸取代硫代谢途径产生的甲硫氨酸，从而影响到Sulforaphane的代谢合成。 为了研究SMT基因对萝卜硫素的调控作用，我们对SMT基因进行了克隆和超表达，并获得了以下结果： 1.采用RT-PCR方法从青花菜幼叶中克隆出硒甲基转移酶(Selenocysteine methyltransferase，SMI)基因的编码序列，长度为1041 bp。同源性比较结果表明：与GenBank上已报道的SMT基因(GenBank No.AY817737)同源性达99％。 2.构建了硒甲基转移酶基因的超表达和RaNAi载体。以pBI121质粒为基础，构建了由CaMV35S启动子调控的SMT基因的超表达载体pBI121-SMT；同时还克隆出SMT基因的一段473 bp高保守序列SP，并把它们正反向插入到载体pJM007的内含子两侧，形成一个SP(RNAi)元件，经Pst酶切并克隆到植物表达载体pCAMBIA1301，形成pCAMBIAl301+SP(RNAi)载体。 3.通过冻融法把pBI121-SMT载体转移到根癌农杆菌(Agrobacterium tumefaciens)LBA4404中。利用带有pBI121-SMT载体的根癌农杆菌LBA4404，遗传转化青花菜，经过卡那霉素筛选获得再生植株20株。经过PCR检测，获得8个转基因再生株系，经荧光定量PCR分析表明转基因植株中硒甲基转移酶基因的表达有明显的提高。谢氏丙酸杆菌维生素B12代谢途径基因组改组一品红PAL基因克隆与表达的初步研究桑树苯丙氨酸解氨酶基因的克隆及生物信息学分析 为更全面深入地理解细胞内谷氨酸代谢的调控机制，以黄色短杆菌GDK-9为供试菌株，应用MATLAB软件和代谢流分析方法定量研究添加苹果酸后L-谷氨酸发酵中、后期胞内的代谢流迁移。在L-谷氨酸发酵中、后期添加2.0异/L-苹果酸后，合成副产物～丙氨酸和乳酸的代谢流量明显减少，分别降低了22.1％和16.5％，EMP途径和乙醛酸循环的代谢流分别减少了2.26％和9.09％，HMP途径的代谢流增加了2.2 6％，而一谷氨酸生物合成的代谢流从73.59％增长至79.92％，较未添加前提高了6.33％。添加适量苹果酸能使关键节点发生代谢流迁移，提高了谷氨酸合成中心代谢途径的代谢流量。 本文拟对细胞的整体代谢网络进行代谢网络定量分析，并以此为着手点，着重对添加苹果酸前后 L-谷氨酸生物合成中的关键节点所发生的代谢流迁移进行分析，以期找到菌种改造和发酵过程控制优化的新突破点，继而进一步强化L-谷氨酸生物合成代谢流，从而使L-谷氨酸发酵产酸水平及糖酸转化率得以大幅度提高。前期研究工作表明6-磷酸葡萄糖、丙酮酸和异柠檬酸是黄色短杆菌GDK-9合成谷氨酸代谢网络的关键节点。当EMP途径的流量超过TCA循环的代谢能力时，丙酮酸的进一步代谢受阻，故通过其它途径进行代谢，进而导致乳酸、丙氨酸等副产物的生成，造成碳架的浪费。因此，在补料分批发酵生产L-谷氨酸的过程中，适当减少EMP途径的代谢流量，降低副产物乳酸、丙氨酸、赖氨酸等的生成以及控制乙醛酸循环和TCA循环间的流量分配是提高L-谷氨酸发酵产酸率和糖酸转化率的关键。在发酵培养基中不添加或添加 2.0g/L苹果酸 ( 除苹果酸外其他培养基组分及发酵条件均控制在同一水平且耗糖总质量一致)，分别对其发酵中、后期进行代谢流分析，并对其代谢流迁移进行研究。测定发酵中、后期葡萄糖、 3种氨基酸( L-谷氨酸、L-丙氨酸、L-赖氨酸) 和乳酸的质量浓度，并对其变化速率及代谢流量进行计算。运用MATLAB软件通过线形规划计算得到苹果酸添加前后-谷氨酸发酵中后期的代谢流分布。 应用代谢流分析技术定量研究了添加适量苹果酸对谷氨酸发酵过程中后期细胞内代谢流迁移的影响。苹果酸的添加使合成副产物丙氨酸、乳酸、L-赖氨酸 的代谢流量分别减少了22.1％、16.5％、25.3％，EMP途径和乙醛酸循环的代谢流分别减少了2.2 6和 9.