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方法 CELLQUANT FF-CD146 将包被CD146单抗的铁磁性纳米颗粒(CD146FF)与1mL 血孵育 富集的CD146+细胞用以下试剂染色 PI(碘化丙啶) (确定有核细胞) CD45-FITC(排除WBC(白细胞)干扰) CD146-PE单抗(识别CD146抗原的另一位点) 标准浓度微球(用于绝对计数) 流式分析(循环内皮细胞鉴定) 有核细胞(PI+); CD45-; CD146+;前向散射角(FSC)范围宽 CELLQUANT FF-CD146 PI-CD45 FITC CELLQUANT FF-CD146 PI-CD45 FITC CELLQUANT FF-CD146 CELLQUANT FF-CD146 CELLQUANT FF-CD146 所有产品与技术信息 请登录 免费电话：800 8571 184 * * 首届南京流式沙龙 2003 年 12月19日 定量流式细胞术 Tetramer (四聚体) 血小板活化 Tetramer(四聚体) Tetramer-原理 内源性抗原 外源性抗原 Tetramer-原理 MHC Class I-HLA-A2 Tetramer-原理 Allophycocyanin: APC Tetramer-原理 国外医学免疫学分册 2001；24(2):102-105 HLA Class I 限定性肿瘤抗原肽 抗原特异性CTL的分析方法 51Cr释放实验 PCR法 酶联免疫斑点法(ELISPOT) 扩增特异T淋巴细胞受体 Tetramer法 间接法 需大量的特异性CTLs作为效应细胞 需体外扩增，周期长，敏感性低， 费时费力 难以广泛应用 敏感性高 但只能用于已知TCR基因型的特异性CTLs检测 直接法 敏感性高 不受TCR基因型的限制 有限稀释法(LDA) 用Tetramer法研究表明，外周血中仅有0.2-2.5% 的CD8+细胞对CMV和EBV特异 Tetramer法 Doherty PC.The numbers game for virus-specific CD8+T cells[J]. Science,1998,280:227 了解病毒特异性CTL和记忆性CTL方面的一项革命 检测病毒特异性CD8细胞的金标准(Gold Standard) Tetramer-应用 感染性疾病 HIV-AIDS, EBV, CMV, HPV, HBV, HCV, Influenza, Measles, Malaria, TB and RSV Breast, Prostate, Melanoma, Colon, Lung, Cervical, Ovarian and Leukemia Diabetes, Lyme disease, Multiple sclerosis, Rheumatoid arthritis, Autoimmune vitiligo EBV and CMV 移植 自身免疫性疾病 肿瘤 Tetramer-应用-例证 感染性疾病 含有HIV-I型病毒包膜肽等三种抗原肽：HIV特异性CTL数量与血浆中RNA病毒量有明显的负相关，而与产毒性感染细胞的清除率无关 慢性HCV感染患者的特异性CTLs数量明显少于急性HCV感染和已康复患者 用黑色素瘤抗原诱导潜在的肿瘤特异性T细胞—用Tetramer分离，富集 GVHD(移植物抗宿主反应)：受体与供体的次要组织相容性抗原(mHags)的不同引起，在骨髓移植后早期出现(14天内)，造成骨髓移植失败---HLA-mHags肽四聚体监测mHags特异性CTL，以了解对GVHD的临床治疗效果 HLA-A2/pp65 Tetramer监测肾移植患者感染CMV后的免疫应答能力 移植 肿瘤 1996- 126篇(8篇综述), 机会难得！！！ Tetramer-试剂 HA-1, (HLA-B7)-HY 次要抗原 Influenza A, CMV, EBV, EBV, HIV, HBV(soon) 病毒抗原 MART, Tyrosinase-D, MAGE-3, GP-100, NY-ESO, WT-1, HTERT, G250 肿瘤抗原 抗原 Tetramer-试剂 MHC 等位型 小鼠MHC I-Ab Kb DRB1*0401 A*0101 A*0201 A*0301 A*1101 B*0702 B*0801 B*3501 Db 人HLA Class II Class I Tetramer-试剂 4-6周 时间 预 制 Tetramer 级肽 1mg, 2.5mg, 10mg 规格 PE 和 APC 标记 50 T 和250 T 规格 定 制 PE 和 APC