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两种脱细胞方法制备组织工程气管基质的比较
两种脱细胞方法制备组织工程气管基质的比较
蒋 媛,徐艳飞,张思泉,史宏灿(扬州大学医学院胸外科,江苏省扬州市 225001)
引用本文:蒋媛,徐艳飞,张思泉,史宏灿. 两种脱细胞方法制备组织工程气管基质的比较[J].中国组织工程研究,2016,20(51):7642-7647.
DOI: 10.3969/j.issn.2095-4344.2016.51.006 ORCID: 0000-0001-6718-5247(史宏灿)
文章快速阅读:
文题释义:
脱细胞方法:包括物理、化学和酶学方法等。物理法可以破坏细胞膜,但无法完全去除细胞,必须联合酶学及化学方法。化学方法主要是用化学试剂,如离子洗涤剂、非离子洗涤剂等处理组织或器官,酶学方法主要是用核酸酶、胰蛋白酶等处理原生组织及器官。
去污剂联合酶法制备脱细胞气管基质:采用脱氧胆酸钠联合脱氧核糖核酸酶I进行脱细胞处理,处理后气管在基质结构方面均与原生气管相似,除纤毛上皮细胞成分被完全除去,纤毛上皮细胞成分是介导宿主免疫排斥反应的主要抗原物质,其他成分均能较好保留。
摘要
背景:完整的新鲜气管脱细胞处理后,能够获取与原生组织结构和生物学性能相似的组织工程基质,寻找有效的脱细胞方法是目前组织工程研究的重点之一。
目的:比较化学萃取法、去污剂联合酶法制备兔组织工程气管基质的差异,遴选出较理想的脱细胞方法。
方法:切取30只新西兰兔气管,随机分3组处理,对照组不进行任何处理,化学萃取法组采用2%TritonX-100联合脱氧核糖核酸酶Ⅰ和核糖核酸酶进行脱细胞处理,去污剂联合酶法组采用脱氧胆酸钠联合脱氧核糖核酸酶Ⅰ进行脱细胞处理。将3组样本进行苏木精-伊红染色、Masson三色染色、番红O染色及DAPI染色及扫描电镜观察。
结果与结论:①苏木精-伊红染色:与对照组相比,化学萃取法组、去污剂联合酶法组气管脱细胞处理后黏膜上皮细胞成分基本被除去,残留部分软骨细胞;②Masson三色染色:与对照组相比,化学萃取法组、去污剂联合酶法组黏膜层核物质被完全除去,仅在软骨区残留部分软骨细胞;③番红O染色:与对照组相比,化学萃取法组、去污剂联合酶法组糖胺聚糖含量有轻微下降,化学萃取法组下降更为明显;④DAPI染色:化学萃取法组、去污剂联合酶法组仅在致密软骨层及腔隙中残留少量软骨细胞;⑤扫描电镜:去污剂联合酶法组上皮细胞被完全去除,基底膜结构相对较完整;化学萃取法组上皮细胞也被完全去除,但基底膜结构相对不完整;⑥结果表明:去污剂联合酶法脱细胞效果较佳,对基质破坏小。
关键词:
组织构建;组织工程;脱细胞;细胞外基质;兔;气管;国家自然科学基金
主题词:
细胞外基质;气管;组织工程
基金资助:
国家自然科学基金面上项目81370118);江苏省大学生实践创新训练计划(201511117033Z);扬州大学“高端人才支持计划”项目(201431)
Chemical extraction method versus detergent-enzymatic method for the preparation of tissue-engineered trachea matrix
Jiang Yuan, Xu Yan-fei, Zhang Si-quan, Shi Hong-can (Department of Thoracic Surgery, Medical College of Yangzhou University, Yangzhou 225001, Jiangsu Province, China)
Abstract
BACKGROUND: Acellular tracheal matrix is similar to the native trachea with structure and biological performance preserved after decellularization, and it is an important aim in tissue engineering to find an effective method of decellularization.
OBJECTIVE: To select the optimal decellularization method through comparing chemical extraction method with detergent-enzymatic method for preparing rabbit tissue engineering trachea matrix.
METHODS: Thirty
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