实验三荧光光度法测定硫酸奎尼丁含量.doc

实验三 2012级检本四班 樊朔卿 2012222114 实验目的和要求 2.了解荧光产生及测量的过程?；? 3.掌握荧光分光法的定量分析方法（标准曲线法）?；? 4.掌握影响荧光强度的因素。 实验原理 ，分子量为782.96，分子结构如图所示：??? 其结构分为喹啉环和喹啉碱两个部分，根据其喹啉环结构部分具有产生荧光的特性，采用荧光光度计测量其荧光强度，可实现硫酸奎尼丁含量的测定。 实验仪器与试剂 1. 2.硫酸奎尼丁标准储备溶液（100ug/ml）?????????????????? 3.硫酸溶液（0.050mol/L）；? 4.硫酸奎尼丁标准样品溶液?????????????????? 5.50ml容量瓶6个；????? 6.5ml移液管2只?????????????????? 7.1cm石英荧光比色皿1个 实验步骤 按照下表配制硫酸奎尼丁标准系列溶液及样品溶液? 2.?荧光光谱的绘制? ???? 将荧光波长调节为365nm，用1cm石英荧光比色皿，以5号溶液作为测定溶液，置于荧光光度计样品室中，盖上样品室盖，调节荧光光度计灵敏度，使其最大荧光强度读数在100左右，然后按照下表依次调节荧光波长，测定不同荧光波长下5号溶液的荧光强度；在坐标纸上以测定的荧光强度为纵坐标，荧光波长为横坐标，绘制荧光光谱，并在荧光光谱上找出最大荧光波长。 3.标准曲线制作 激发波长和灵敏度保持不变，荧光波长为λ，用1cm石英荧光比色皿，装入0.050mol/L硫酸溶液，置于荧光光度计样品室中，盖上样品室舱盖，测量荧光强度，然后按照下表依次测定标准系列溶液和样品溶液荧光强度，在坐标纸上以荧光强度的平均值为纵坐标，系列标准溶液的浓度为横坐标制图，绘制标准曲线。 编号 1 2 3 4 5 6（样品） 硫酸溶液 荧光强度F1 20.1 36.3 51.8 67.3 83.3 23.3 0.5 荧光强度F2 19.9 36 52 67.2 82.6 23.1 F平均值 20 36.15 51.9 67.25 82.95 23.2 实验数据处理 =2.376ug/ml 实验注意事项 测定系列标准溶液和样品溶液时，必须使用同一只比色皿。 比色皿放入荧光光度计样品室前，必须用吸水纸将外表面擦拭干净。 3.比色皿在换装不同浓度溶液时，必须用待测溶液润洗至少三次。 4.在比色皿未放入荧光光度计测定光路时，必须将样品室舱盖打开。 讨论及思考调零是为了消除溶剂中离子发荧光而干扰实验结果 如果不调零，对实验结果无影响，因为调零后要 实验第二步中，调节荧光光度计灵敏度时，要 激发光谱和荧光光谱都有吸收峰，但是大部分物质的激发光谱接近365nm，而不同物质的荧光光谱最高峰不同，这是定性的依据。