微生物遗传育种作业(需要自己整理答案).docxVIP

《微生物遗传育种》试题基因发生移码突变后，基因编码的蛋白质一般是变得更长还是更短，为什么？不变或变短，当DNA进行复制时，就会造成多出一个或几个碱基，或少了一个或几个碱基而引起移码突变，但移码的时候最后可能剩下最后一个密码子的残余部分无法翻译。如果是插入导致移码则增加的插入碱基和最后残余的一个无法翻译的碱基抵消，总长度不变。如果是缺失突变则最后一个密码子缺少碱基无法翻译。试述紫外诱变筛选Ecoil strr突变株的一般步骤，并说明主要步骤的目的及其注意事项。抗药性突变型（resistant mutant）特点：基因突变使菌株对某种或某几种药物，特别是抗生素，产生抗性。正选择标记表示方法：所抗药物的前三个小写斜体英文字母加上“r”表示strr表示对链霉素的抗性1、物理诱变：紫外线1）紫外线诱变机理：造成DNA链的断裂，或使DNA分子内或分子之间发生交联反应2）诱变过程中需要注意光复活作用：微生物等生物的细胞内存在光复活酶，光复活酶识别胸腺嘧啶二聚体，并与之结合形成复合物（此时的光复活酶没有活性），可见光光能（300-500nm）激活光复活打开二聚体，将DNA复原。暗修复：细胞内还存在另一种修复体系，它不需要光激活，可修复由紫外线、γ射线和烷化剂等对DNA造成的损伤。暗修复体系有四种酶参与反应。紫外诱变的特点：方便、诱变效果很好的常用诱变剂由此说明紫外线照射引起微生物突体形成是一个复杂的生物学过程。紫外线引起DNA结构的改变仅仅使微生物，于亚稳定状态，点亚稳定到稳定的突变体的形成需要“定时间和过程，所以在实际诱变工作中要采取某些措施避免以上的修复作用，要注意避光或加入某些物质，提高突变的频率。因此，用紫外线进行诱变时，照射或分离均应在红光下进行。初筛的目的：以多为主，尽量扩大筛选范围。是将大多数未变异菌株或负变菌株去除，这时解决的主要是量的问题，因此每株菌培养时一般只在一种培养条件下培养一瓶；培养条件一般沿用出发菌株的培养条件，分析方法也选用适于处理大量样本的、操作简便而快速的方法。复筛：以质和精为主，反复多次。此时量的矛盾已不突出，而对准确性有了更高的要求，因此复筛一般要培养2--3瓶，分析方法一般选用经典方法或标准方法，有时要进行几次复筛。1.随机筛选(即摇瓶筛选)优点：不管种子或发酵过程的生产条件、生理条件如何，都与发酵罐大生产条件相近，可以模拟进行。缺点：在突变率小的情况下，如果菌落挑取少，很难筛选到理想的突变株。2. 平板菌落预筛平板菌落筛选是根据菌落形态或根据特定代谢，在琼脂平板上设计许多巧妙的筛选方法和活性粗测方法，从大量菌株中筛选出用于摇瓶发酵初筛的菌株.琼脂块大通量筛选突变株优点1：判断活性圈准确。所有菌落限制在同面积琼脂块上，避免相互干扰；每个菌落的产物都在相同体积的琼脂块中，避免扩散造成的误差。优点2：大幅度增加筛选量不足：培养条件与发酵条件有较大距离，易漏筛对摇瓶发酵液的测试数据要尽量应用生物学统计方法来处理。周密地观察并记录，综合菌落的形态特征、培养特征及生化特征作为初筛时挑选菌落的依据。筛选过程中摇瓶产量数据的分布作全面分析，以便判断诱变剂、诱变剂量及筛选条件的选择是否恰当。试对微生物中存在的主要基因重组方式进行简单比较。主要有转化、转导、接合、接合。1.转化：受体菌直接吸收了来自供体菌的DNA片段，通过交换整合到自己的基因组中，从而获得部分新的遗传型状的现象。2.转染：把噬菌体或其它病毒的DNA（或RNA）抽提出来，让它去感染感受态的宿主细胞，并进而产生正常的噬菌体或病毒的后代，这种现象称为转染。3.转导：通过完全缺陷或部分缺陷噬菌体的媒介，把供体细胞的DNA小片段携带到受体细胞中，通过交换与整合，使后者获得前者部分遗传形状的现象。4.接合：是指细菌通过细胞间的接触而导致遗传物质的转移和基因重组的过程，又称细菌杂交。以谷氨酸棒杆菌为出发菌株，通过代谢调控育种，为什么筛选高丝氨酸突变株可以获得赖氨酸高产菌株？进一步说明营养缺陷型菌株筛选的主要步骤及其理由。工业上选育高丝氨酸营养缺陷型（Hom-）的谷氨酸棒杆菌作为赖氨酸的发酵菌株。由于它不能合成高丝氨酸脱氢酶（HSDH），故不能合成高丝氨酸，①阻断了合成Met和Thr的支路代谢，节省了原料，使天冬氨酸半醛这个中间产物全部转入Lys的合成；②在补给适量高丝氨酸（或苏氨酸和甲硫氨酸）的条件下，使Met和Thr的生成有限，从而解除了Thr和Lys对天冬氨酸激酶（AK）的协同反馈抑制，使Lys得以积累；能产生大量赖氨酸。营养缺陷型：野生型菌株经过人工诱变或自然突变失去合成某种营养的能力，只有在基本培养基中补充所缺乏的营养因子才能生长。筛选营养缺陷型的步骤（一）诱变（二）淘汰野生型（三）检出缺陷型（四）确定生长谱（一）、营养缺陷型菌株的分离和筛选一般经诱变后，再经