紫外、亚硝酸钠诱变筛选高产耐有机溶剂脂肪酶菌株-计算机工程与科学.doc

紫外、亚硝酸钠诱变筛选高产耐有机溶剂脂肪酶菌株* 吕 熹，王 刚，李 俊，王海娟，陈 光** 吉林农业大学生命科学学院， 长春 130118 摘要：以蜡状芽孢杆菌SW06为出发菌株，通过紫外诱变筛选得到突变株BZ-3，其产脂肪酶的活力较SW06提高2.49倍。再对BZ-3进行亚硝酸钠诱变，得到突变株BF-3，产脂肪酶活力较SW06提高4.11倍。将BF-3传到第5代，其产酶较稳定。关键词：蜡状芽孢杆菌脂肪酶诱变Q814　　1000-5684(2010)04-0394-04 网络出版地址： DOI: Screening of Organic Solvent Tolerant Lypase-Producing Strains Mutated by UV and NaNO2 LV Xi，College of Life-Science, Jilin Agriculture university，Changchun 130118，China Abstract：The original strains Bacillus cereus SW06 were mutated by UV, then the new strain BZ-3 w screened and their lypase productivity improved 2.49 times than before. Another new strains BF-3 were screened after the strains BZ-3 mutated by NaNO2, improved 4.07 times than the original strains SW06. When the BF-3 was propagated to the fifth generation, their lypase productivity were stable. Key words：Bacillus cereuslypase ; UV mutagenesis; NaNO2 mutagenesis 脂肪酶( EC) 是一类特殊的酰基水解酶，能在油水界面上催化酯水解或醇解、酯合成、酯交换、内酯合成、多肽合成、高聚物合成以及制备手性药物等有机合成反应，它可将甘油三酯分解成脂肪酸和甘油或进行其逆反应[1],在工业生产中有着广泛的应用。与水相催化相比，酶在有机相中的催化反应有许多优点，已成为20世纪80年代以来酶工程学研究的新领域。脂肪酶以其来源广、催化功能多、稳定性好和底物特异性多样化而成为这一新领域的研究热点[2]。目前，脂肪酶被广泛的应用于药物合成、环境治理、食品工业、肽合成、高分子合成等方面。马来西亚的Chin John Hun[3]成功筛选出耐有机溶剂的脂肪酶生产菌，并且最高的有机耐受量达到70%。Faizal[4]等把活性污泥样本加入到以甲苯作为唯一碳源的矿物盐类基本培养基上富集培养，从中分离得到了Pseudomonas putida T-57 菌株，该菌株可利用丁醇、甲苯、苯乙烯、二甲苯、乙苯、己烷和丙苯作为生长底物，能够在甲苯和矿物盐类含量10%～90%的培养基上生长，并能忍受logP 高于2.5 的有机溶剂。Kyung-Su[5]等也分得到了耐苯菌株Rhodococcus opacus B-4本试验以蜡状芽孢杆菌SW06为出发菌株，经紫外-亚硝酸钠复合诱变，筛选出一株高产脂肪酶的突变株。1 材料与方法1.1试验材料 1.1.1原始菌株 蜡状芽孢杆菌（Bacillus cereus）SW06由吉林农业大学生命科学学院生物工程实验室保存。 1.1.2 培养基 斜面培养基：酵母膏0.5%，蛋白胨1%，橄榄油0.1%，NaCl 0.5%，琼脂2%，pH 7.0，121°C高压蒸汽灭菌20 min。 选择培养基：酵母膏0.5%，蛋白胨0.5%，NaCl 0.5%，琼脂 20%，橄榄油乳化液（将4g聚乙烯醇加热溶于100ml的蒸馏水中，之后与橄榄油以体积比为3：1的比例混合，超声搅拌乳化120s）12%，pH 7.0，121°C高压蒸汽灭菌20 min。 种子培养基：蛋白胨1%，葡萄糖1%，酵母浸粉0.2%，121°C高压蒸汽灭菌20 min。 发酵培养基：酵母膏0.5%，NaCl 0.25%，MgSO4·7H2O 0.1%，橄榄油0.3%，甲苯20%，pH 7.0，121°C高压蒸汽灭菌20 min。 1.2 实验主要仪器及试剂 PB-10型数字酸度计（德国赛多利斯股份公司），SIGMA3K18低温高速离心机（美国SIGMA公司），78-1恒温磁力搅拌器（金坛市富华仪器有限公司），MJ-16085-Ⅱ培