瘦素ELISA检测试剂盒说明书.doc

 HYPERLINK  PAGE 1 更多相关文档免费下载请登录:  HYPERLINK -中文word文档库 瘦素ELISA检测试剂盒说明书 本文档由【 HYPERLINK 中文word文档库】 HYPERLINK 提供，转载分发敬请保留本信息；  HYPERLINK 中文word文档库免费提供海量范文、教育、学习、政策、报告和经济类word文档。 a href=/word文档/a （测定范围：0－50ng/ml） 概述 瘦素是由肥胖（OB）基因编码，主要在脂肪细胞中表达的蛋白激素，含146个氨基酸，分子量16KD。循环中的瘦素水平可反映体脂的多少，作为一种外周信号向中枢反馈体内贮脂的程度，并通过其在下丘脑受体控制食欲、增加能耗，以减低体重。基因突变导致瘦素无功能或其受体功能受损的小鼠表现为过度摄食、代谢降低、氧耗减少、过度肥胖、糖尿病和不育，用瘦素治疗小鼠可逆转上述异常。外源性瘦素作用于正常小鼠，能使其摄食减少，氧耗增加，体重减轻，性成熟早发。饮食引起的肥胖小鼠及人的瘦素治疗试验显示，可以纠正其高血糖、高胰岛素/胰岛素抵抗等代谢异常状态。除肥胖外，瘦素的循环水平还受多种因素调控，禁食、雄激素、冷刺激和胰岛素增敏剂等可以降低瘦素水平，而过度进食、胰岛素、糖皮质激素及一些细胞因子可以促进脂肪细胞瘦素的分泌。尽管大量的资料研究了瘦素在肥胖中的作用，近来，越来越多的注意力集中于瘦素在代谢适应、生长发育中的独特作用。 血中瘦素含量的检测已成为研究肥胖及其相关疾病发病机制和防治的重要手段和指标。本试剂盒采用生物素—亲和素放大系统，选取针对瘦素不同抗原决定簇的抗体分别用于固化于微孔中和生物素标记，夹心法定量地检测人血清（浆）中瘦素的含量，特异性强，灵敏度高。适于临床血样本测定及基础研究之用。 试剂盒组成 96孔预包被微孔板 1个 20×???免试验缓冲液 1瓶（50ml） 人瘦素标准品 1管（50ng） 生物素标记瘦素抗体 1管（100μl） 亲和素-辣根过氧化物酶溶液 1管 (10μl) 底物溶液（TMB） 1瓶（12ml） 终止液（2N HCL） 1瓶（15ml） 封板模 1张 自备材料： 酶标仪（带450nm） 加样器，带10μl、100μl、1000μl的一次性尖头 吸水纸/巾 去离子水 试验试剂的准备 1×试验缓冲液： 950ml去离子水中加入浓缩的酶免试验缓冲液即可。本缓冲液用于试验板的洗、溶解或稀释本试剂盒中的其他组分。浓缩缓冲液使用之前置于37℃水浴中使其结晶完全融化。配制好的1×试验缓冲液置于4-8℃保存。 生物素标记的人瘦素抗体：用100μl试验缓冲液重溶冻干粉（先离心装有冻干粉的管，避免丢失粘在管壁或盖上的抗体冻干粉）。使用前将本抗体用试验缓冲液按1︰100稀释成工作液。 亲和素-辣根过氧化物酶（SA-HRP）：使用之前用试验缓冲液1︰4000稀释成工作液。 人瘦素标准品的准备 标准管号标准品体积试验缓冲液标准品浓度原液冻干粉1000μl50ng/ml#1300μl of原液700μl15ng/ml#2100μl of原液900μl5ng/ml#3100μl of#1900μl1.5ng/ml#4100μl of#2900μl0.5ng/ml#5500μl of#4500μl0.25ng/ml 检测程序 将试剂从4℃冰箱取出，室温平衡。 设计实验，并在微孔条上做好标记。 在相应孔中加入50μl标准品从#5到原液（与稀释顺序相反）、血清/血浆标本，标准需做双复孔。 在已加有标准品、或标本的各孔中加入50μl稀释后的生物素化瘦素单抗工作液，混匀，室温轻摇（450~500rpm）2小时。 甩去孔中反应液，在干净吸水材料上拍干后加满试验缓冲液，放置10-15秒后拍干，如此重复5次，也可用洗板机洗6次。 每孔加入100μl已稀释好的亲和素-辣根过氧化物酶结合物工作液，置室温轻摇（450~500rpm）30分钟，重复第5步骤。 每孔加100μl底物（TMB）溶液，室温闭光反应10-15分钟。 每孔