06核糖体与核酶[资料].docVIP

第六章.核糖体与核酶 HYPERLINK javascript:openWindow(../word/word_06_01.htm) 核糖体(ribosome)，是细胞内一种核糖核蛋白颗粒(ribonucleoprotein particle), 其惟一功能是按照mRNA的指令将氨基酸合成蛋白质多肽链,所以核糖体是细胞内蛋白质合成的分子机器。 核糖体最早是Albert Claude于20世纪30年代后期发现的, 其后又证明了其蛋白质合成功能。 随着分子生物学的发展， 核糖体概念的涵意有了进一步的发展。细胞内除了从事蛋白质合成的核糖体外， 还有许多其它功能的核糖核蛋白体颗粒， 通常是一些小分子的RNA同蛋白质组成的颗粒， 它们参与RNA的加工、RNA的编辑、基因表达的调控等。 HYPERLINK javascript:openque(../question/question_06_01.htm) 发现核糖体及核糖体功能鉴定的两个关键技术是什么?( 发现核糖体及核糖体功能鉴定的两个关键技术是什么?（答案） 答: 核糖体最早是Albert Claude于1930s后期用暗视野显微镜观察细胞的匀浆物时发现的，当时称为微体(Microsomes)，直到1950s中期，George Palade在电子显微镜下观察到这种颗粒的存在。当时George Palade和他的同事研究了多种生物的细胞，发现细胞质中有类似的颗粒存在，尤其在进行蛋白质合成的细胞中特别多。后来Philip Siekevitz用亚细胞组份分离技术分离了这种颗粒，并发现这些颗粒总是伴随内质网微粒体一起沉积。化学分析揭示，这种微粒富含核苷酸，随之命名为ribosome，主要成分是核糖体RNA(rRNA)， 约占60%、蛋白质(r蛋白质)约占40%。 核糖体的蛋白质合成功能是通过放射性标记实验发现的。将细胞与放射性标记的氨基酸短暂接触后进行匀浆，然后分级分离，发现在微粒体部分有大量新合成的放射性标记的蛋白质。后将微粒体部分进一步分离，得到核糖体和膜微粒，这一实验结果表明核糖体与蛋白质合成有关。 两个关键技术是亚细胞组份分离技术和放射性标记技术。 ) ? 6.1 核糖体的形态结构 核糖体是细胞内数量最多的细胞器，原核细胞和真核细胞都有核糖体，功能也相同，但是结构组成却有很大差别。 6.1.1 核糖体的类型和化学组成 ■ 核糖体的类型 ● 按存在的部位:有三种类型核糖体，细胞质核糖体、线粒体核糖体、叶绿体核糖体。 ● 按存在的生物类型: 分为两种类型，即真核生物核糖体和原核生物核糖体。原核细胞的核糖体较小， 沉降系数为70S，相对分子质量为2.5x103 kDa，由50S和30S两个亚基组成(图6-1)；而真核细胞的核糖体体积较大， 沉降系数是80S，相对分子质量为3.9～4.5x103 kDa， 由60S和40S两个亚基组成。 图6-1 从两个不同角度观察的E.coli 核糖体的三维结构 ● Mg2+ 的浓度对于大小亚基的聚合和解离有很大的影响， 体外实验表明:70S核糖体在Mg2+的浓度小于1mmol/L的溶液中易解离; 当Mg2+浓度大于10mmol/L， 两个核糖体通常形成100S的二聚体(图6-2)。 图6-2 通过区带离心鉴定核糖体的亚基 在低浓度的Mg2+时，完整的核糖体将分成大小两个亚基。 ● 在组成上，叶绿体中的核糖体与原核生物核糖体相同，但线粒体中核糖体的大小变化较大(表6-1)。 表6-1 不同类型核糖体的大小比较 来源 完整核糖体 核糖体亚基 核糖体RNAs 细胞质 80S 60S(大亚基) 28S，5.8S，5S (真核生物) ? 40S(小亚基) 18S， 细胞质 70S 50S(大亚基) 23S，5S (原核生物) ? 30S(小亚基) 16S 线粒体 55-60S 45S(大亚基) 16S (哺乳动物) ? 35S(小亚基) 12S 线粒体 75S 53S(大亚基) 21S (酵母) ? 35S(小亚基) 14S 线粒体 78S 60S(大亚基) 26S，5S (高等植物) ? 45S(小亚基) 18S 叶绿体 70S 50S(大亚基) 23S，5S ? ? 30S(小亚基) 16S ? ■ 核糖体的化学组成 核糖体的大小两个亚基都是由核糖体RNAs(rRNAs)和核糖体蛋白(ribosomal proteins)组成的， 原核生物和真核生物细胞质核糖体的大小亚基在蛋白质和RNA的组成上都有较大的差别(图6-3) 图6-3 典型的原核细胞和真核细胞质核糖体的化学组成 6.1.2 核糖体蛋白质与rRNA 由于核糖体有着十分重要的生物学功能，所以有关其结构和各种结构域的功能，一直是研究的重点。为了建立一个完整的核糖体分子结构模型，必须了解构成核