2014-2015年中南大学博士生分子生物学考试试题.docx

2015年 问答题 什么是RNAi？简述RNAi技术的原理和其应用前景。 答：RNAi是指在进化过程中高度保守的、由双链RNA诱发的，同源mRNA高效特异性 降解的现象。 应用前景：1.研究基因功能的新工具，利用RNAi技术选择性沉默基因进行功能学实验的检测；2.研究基因传导通路的新途径，利用传统的缺失突变技术和RNAi技术可以很容易地确认复杂的信号传导途径中不同基因的上下游关系。3.开展基因治疗的新策略，RNAi具有抵抗病毒入侵，抑制转座子活动，防止有害基因序列过度增殖的作用，还可以抑制单一癌基因的过度增殖，达到治疗肿瘤的目的。 什么是重组DNA技术？简述重组DNA技术的基本过程。 答：它是将一种生物体（供体）的基因与载体在体外进行拼接重组，然后转入另一种生物体（受体）内，使之按照人们的意愿稳定遗传并表达出新产物或新性状的DNA体外操作程序； 基本过程：1.目的基因的获取；2.克隆基因与载体的连接； 3.重组DNA导入受体菌； 4.重组体的筛选；6.克隆基因的表达。 与传统医学诊断方法相比，基因诊断有哪些特点或优势？ 答：基因诊断是利用分子生物学技术从DNA水平检测人类遗传性疾病的基因缺陷，是一种新的临床诊断方法。 基因诊断的特点：1.不受材料来源的影响：外周血，活体穿刺组织，孕妇外周血，血斑等；2.症状前诊断 ：尤其对一些迟延显性疾病如Huntingtong舞蹈病；3.产前诊断：避免患儿出生，提高人口质量。 与双脱氧末端终止法为基础的第一代测序相比，新一代测序技术在测序原理和应用范围上有哪些不同？ 简述逆转录病毒载体的基本结构特点及其在基因治疗中的应用。 答：1.结构基因gag，pol，evn被删除；2.病毒的包装信号被保留；3.载体中带有一个抗性标记基因，供阳性筛选用，常用的新霉素磷酸转移酶基因neo。4.载体中有合适的酶切位点，供插入目的基因。5’端LTR中的增强子，启动子序列，3’端LTR中的polyA信号均可用于目的基因的表达。 1.转染范围广，可以感染各种细胞类型，如淋巴细胞，肝细胞，肌细胞；2.转入的外源基因可以完全整合；3.感染细胞不产生病变，可建立细胞系长期持续表达外源基因。 名词解释 Site-directed integration基因定点整合技术又称为基因打靶，是指构建含有同源序列的片段的整合载体，通过各种转化方法，使得外源序列与靶序列之间发生同源重组，从而将靶序列定点破坏，通过一系列筛选手段，最终得到定向转化的细胞 Single nucleotide polymorphism单核苷酸多态性：在基因组序列中由单个碱基的变化引起的一种DNA序列变化 Tandem repeats重复序列：是指在一个基因组中有多个拷贝的碱基顺序，根据重复片段的长度及重复的频率分为：高度重读序列，中度重复序列；以各自的核心序列首尾相连多次重复。 Monocistron单顺反子 真核生物基因转录产物为单顺反子，即一条mRNA模板只含有一个翻译起始点和一个终止点，因而一个基因编码一条多肽链或RNA链，每个基因转录有各自的调节元件。 polycistron多顺反子:原核生物中数个结构基因常常串联为一个转录单位，转录生成的mRNA可编码几种功能相关的蛋白质。 Sequencing by synthesis 合成测序：通过聚合酶或连接酶不断地延伸引物获得模板序列，最后对每一轮反应的结果进行荧光图像采集、分析、获得序列结果。 Split gene 断裂基因：真核生物结构基因，由若干个编码区和非编码区相互隔开但又连续镶嵌而成，去除非编码区再连接后，可翻译出由连续氨基酸组成的完整蛋白质。 Consensus sequence 共有序列：决定启动序列的转录活性大小，各种原核启动序列特定区域内，通常在转录起始点上游-10及-35区域，存在共有序列。 Gene expression profile（基因表达谱）：通过构建处于某一特定状态下的细胞或组织cDNA文库，大规模cDNA测序，分析cDNA序列片段定性，定量分析，从而描绘该特定细胞或组织在特定状态下的基因表达种类和丰度信息，这样编制成的数据表称为基因表达谱。 Real-time fluorescent quantitative PCR：荧光定量PCR是一种在DNA扩增反应，体系中加入荧光染料和荧光探针，利用荧光信号累积实时监测整个PCR进程，最后通过软件计算出体系中核酸的初始浓度。 TATA box TATA盒:人类许多基因的转录起始点上游-25到-30碱基对的位置有一段高度保守的序列 Genomic library 基因组文库：是指含有某种生物体全部基因片段的重组DNA克隆群体。 Shine-Dalgarno sequence (SD序列)：mRNA中用于结合原核生物核糖体的序列，SD序