实验一菠萝蛋白酶的初级纯化及鉴定陈.docVIP

实验一 菠萝蛋白酶的初级纯化及鉴定 一、 目的： 系统地学习和掌握蛋白质分离纯化技术的原理及实验技术。熟练掌握饱和硫酸铵沉淀法、透析法、测定蛋白质含量、蛋白酶活性检测等实验技术。 二、 原理： 要研究某种蛋白质的结构和功能，生产高生物活性的蛋白类激素、酶等，第一步工作就是从复杂的混合体系中分离（ Separation ）出蛋白质并且进行纯化（ Purification ）分析。 1 蛋白质分离纯化的一般程序： ?? 选择一种目的蛋白质含量丰富、稳定性好的样品材料。 ?? 将蛋白质从样品中抽提出来。 ?? 确定分离纯化的方法，使粗品的纯度达到预定要求。 ?? 建立灵敏、特异、精确的检测手段，分步测定蛋白质的含量，检验蛋白质的纯度。 ?? 在操作、分析过程中注意保护蛋白质的稳定性，防止变性。 2 蛋白质的分离纯化方法： 利用溶解度不同的分离纯化方法有：盐析法、 等电点沉淀法、有机溶剂沉淀法、聚乙二醇沉淀法等。 盐析法是粗分离蛋白质的重要方法之一。在稀盐溶液中，蛋白质的溶解度随盐浓度的增加而升高，这种现象称为盐溶（ Salting in ）。但当盐浓度增加到一定量时，其溶解度又逐渐下降，直到某一浓度时便从溶液中沉出，即为盐析。这是因为蛋白质分子吸附某种盐离子后，其带电表层使蛋白质分子彼此排斥，而蛋白质分子与水分子间的相互作用却加强，因而溶解度提高。但当大量中性