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苯甲脒琼脂糖凝胶 4FF 使用说明 货号 ：S9400 规格 ：25mL 产品简介 ： 苯甲脒类物质是丝氨酸蛋白酶的广谱抑制剂，所以将这类物质偶联到琼脂糖凝胶上，可 以从各种来源的样品中一步纯化胰蛋白酶、凝血酶、尿激酶、激肽释放酶、前激肽释放酶等 丝氨酸蛋白酶。 苯甲脒琼脂糖凝胶由于应用新的活化方法所以流速高， 非特异吸附少， 而且填料粒度 均匀，所以分离效果好，是纯化丝氨酸蛋白酶类最适合的填料。 亲和填料特征 ： 特点 载量大，分辨率好，流速高，使用方便。 基质 4%的交联琼脂糖凝胶 配基 苯甲脒 配基密度 7μmol /ml 吸附载量 13 mg 胰蛋白酶/ml 填料的颗粒大小 45-165μm 最大流速 300cm/h pH 范围 3-10，在位清洗时 pH 范围可到 2-11 保存温度 +4~8℃ 保存液体 20%乙醇 适用范围： 一步从各种样品中纯化丝氨酸蛋白酶类物质。 应用实例: 实验名称：苯甲脒琼脂糖凝胶 FF 分离尿激酶。 实验步骤： （1）苯甲脒琼脂糖凝胶 FF 装柱，1.6×20m，柱床体积为 10ml （2）用缓冲液 1 平衡 2-5 个床体积，流速为 2ml/min （3）取尿激酶粗品 200mg 溶解在 20ml 的缓冲液 1 中，用 0.45μm 的滤膜过滤，上样， 流速为 1ml/min （4）用缓冲液 1 再洗 2-5 个床体积，流速为 2ml/min （5）最后缓冲液 2 进行洗脱，流速为 2ml/min，收集洗脱峰，用 SDS纯化后的效 果。 （6）用纯水洗 5 个柱床体积，然后分别用 100mM，pH8.0Tris-HCl 缓冲液含 1M NaCl 和 100mM,pH4.0 的醋酸缓冲液含 1M NaCl 交替洗涤 3 次，再用纯水洗 3 个柱床体积，然后 再用 20%的乙醇流洗 3 个柱床体积，流速为 2ml/min，柱子置于+4~8℃环境中保存。 （7）色谱图见图 1，SDS结果见图 2。 缓冲液组成： 缓冲液 1：100mM pH7.4 的 PBS 缓冲液；缓冲液 2：100mM 醋酸缓冲液，pH4.0。 也可以用这个填料特异去除各种融合蛋白酶切后的丝氨酸蛋白酶，例如凝血酶以及胰蛋 白酶类蛋白酶。例如去除凝血酶上样缓冲液为：50mM pH7.4 的 PBS 缓冲液含 0.15M NaCl, 洗脱缓冲液为：50mM pH7.4 的 PBS 缓冲液含 1M NaCl。 SDS流程： （1）BSA 法测量样品蛋白浓度； （2）根据测定样品的蛋白浓度，算出 5-10μg/