表皮干细胞分离及基因特异性表达.pdf

上 海 第 二 医 科 大 学 学 报 V ol. 24 N o. 12 Dec. 2004 Academic Journal of Shanghai Second Medical University ! 1021 ! 文章编号 0258- 5898( 2004) 12- 1021- 04 !基础研究! 表皮干细胞分离及基因特异性表达 章 雄, 刘 琰, 张 志, 许伟石 ( 上海第二医科大学瑞金医院灼伤整形科, 上海 200025) 摘 要 目的 利用 ?型胶原快速黏附特性分离表 皮干细胞, 以基 因芯片 技术检测 表皮干 细胞基 因特异 性表达。方 法 观察 表 皮角质形成细胞( K Cs) 在 # 、?、?型胶原和纤维连接蛋白( FN) 上的黏附、生长, 相差显微镜 和扫描电 镜观察 ?型 胶原快速黏 附 K Cs 形态, 流式细胞仪测 定细胞周期, 基因芯 片技术 检测表 皮干细 胞基因 特异性表 达。结果 K Cs 在 ?型胶 原上 黏附和 生长 良 好, IV 型胶原上快速黏附的 K Cs 形态较为原始; S 期、G2 / M 期细胞比例分别为( 2. 18 % 1. 85) % 和( 0. 60 % 0. 21) % , 明显低于 非 黏附 KCs 的( 3. 92 % 0. 99) % 和 ( 1. 44 % 0. 78) % , 符 合 表 皮 干 细 胞 的 形 态 和 细 胞 周 期 特 征。与 原 代 KCs 比 较, 黏 附 K Cs CT N NB1、T OB1、P P2R5E 等 21 个增殖相关基因上调, 17 个下调。结论 IV 型胶原是表皮干细胞分离的适宜基质, 在 ?型胶原上 快速黏附的 KCs 符合表皮干细胞的形态和细 胞周期特征。黏附 K Cs CT N NB、T OB1、PP2R5E 等基因表达上调, 可能与表皮干细 胞特性的维持有关。 关键词 表皮干细胞; 基因芯片; IV 型胶原; 黏附 中图分类号 Q 786 文献标识码 A Isolation of epidermal stem cells and study of specific gene expression profile of epidermal stem cells ZHANG Xiong, LIU Yan, ZHANG Zhi, XU Weishi ( Department of Burn and Plastics, Ruijin Hospital, Shanghai Second Medical University , Shanghai 200025 , China) Abstract: Obj ective To isolate epidermal stem cells by adhering to type IV collagen and to study the gene ex pression profile of epidermal stem cells by cDNA microarray technique. Methods T he adhesiveness and the g row th of the keratinocytes( KCs ) in the ty pe # , ?, IV collagen and fibronectin w ere studied. T he morpholog y of KCs adhering to type IV collag en was observed by the inverted microscope and scanning electronic microscope. T he cell cycles of the KCs adhering and nonadhering to type IV collagen was analyzed by flow cytom etry . The g ene ex pression profile of epidermal stem cells were assayed by cDNA microarra