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定量PCR技术原理及其应用.pps.ppt
实时荧光定量PCR技术原理及其应用;1. 原理及其应用
2.应用ABI 7000 sybrgreen方法进行样品检测;Real-time quantitative PCR;;3. Baseline是背景曲线的一段,范围从反应开始不久荧光值开始变得稳定,直到所有反应管的荧光都将要,但是还未,超出背景4.threshold 荧光阈值荧光(Rn)超过本底时的临界数值,在荧光扩增曲线上人为设定的一个值,它可以设定在荧光信号指数扩增阶段任意位置上,但一般我们将荧光域值的缺省设置是3-15 个循环的荧光信号的标准偏差的10 倍5. CT (cycle of threshold )每个反应管内的荧光信号到达设定的域值时所经历的循环数;;
利用已知起始拷贝数的标准品可作出标准曲线,其
中纵坐标代表起始拷贝数的对数,横坐标代表Ct值
因此,只要获得未知样品的Ct 值,即可从标准曲线
上计算出该样品的起始拷贝数。
;;内标基因的选择;相对定量的计算方法;相对定量的计算方法;相对定量的计算方法;实时荧光定量PCR 的化学原理包括探针类和非探针类两种;SYBR Green I; SYBR Green I;TaqMan 探针; TaqMan 探针;TaqMan MGB探针 ;TaqMan MGB探针;实时荧光定量PCR 技术的应用
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