马氏珠母贝DNA快速一步法_ROSE_提取及ISSR_PCR应用_吕林兰.pdf

研究报告 R EPORTS 马氏珠母贝 DNA 快速一步法( ROSE) 提取及 ISSR- PCR 应用 * 吕林兰 1,2 王爱民 3, 4?? 杜晓东 1 严虹羽 3 ( 1 湛江海洋大学 湛江 524025) ( 2 海南省热带农业资源开发利用研究所 三亚 572025) ( 3 海南大学海洋学院 海口 570228) ( 4 广西海洋研究所 北海 536000) 提要 以马氏珠母贝( Pinctada martensii) 为材料, 采用一步法( ROSE) 提取 DNA, 并将提取的 DNA 应用于 ISSR 扩增。结果表明: ROSE 法提取 DNA 比常用的 SDS 法简易, 快捷, 无污染物产 生, 节省费用 99% , DNA 提取效率相当。ROSE 法和常用的SDS 法提取的 DNA 分别用于 ISSR 分 析, 可以获得一致性很好的扩增效果。因此, ROSE 法提取 DNA 是一种适合于海洋贝类大规模 提取 DNA 的有效方法。 关键词 马氏珠母贝( Pinctada martensii) , DNA 一步法提取, PCR 应用 中图分类号 Q78, Q178. 53 文献标识码 A 文章编号 1000-3096( 2003) 10-0042-04 随着现代分子生物学和生物技术的快速发展, 分 SDS 法提取 DNA, 样品 4, 5, 6 用 ROSE 法提取。 子遗传标记技术已广泛地应用于植物、动物和微生物 1. 2 DNA 提取方法 的各个研究领域。RAPD、ISSR、SSR 及 AFLP等分子标 ROSE 法: 本方法按 Steiner [2]和方宣钧等 [3]人的 记已成为研究生物种群遗传学、系统进化及保护生物 方法稍作改进后进行。ROSE 提取缓冲液为 1% SDS, [1] 学等的有效手段 。近年来, 分子标记技术的应用也 10 mmol/ L Tris-HCl , 0. 3 mol/ L EDTA, 2% PVPP, 日益受到海洋生物学家的重视。然而, 以 DNA 为研究 pH8. 0。实验操作如下: 对象的分子遗传与育种学研究大都具有特殊的生活 ( 1) 取马氏珠母贝闭壳肌 0. 2 g 剪碎置于 1. 5 mL 环境, 样本采集数量大, 样本需要长时间保存及只能 的 Eppendorf 管中。( 2) 加 500 LL 的 ROSE 提取缓冲 运回实验室进行 DNA 的大量提取等问题为海洋分子 液, 混匀后置于 90 e 水浴中, 不时颠倒混匀, 温育 20 [2] 生物学研究带来了不便和困难。1995 年 Steiner 等 首 min。( 3) 于冰浴中 5 min, 使组织和