第二章 植物基因工程.docVIP

PAGE  PAGE 10 第二章 植物基因工程 ? 知识要点 一? ? 基因工程概述 二? ? 、植物基因克隆的原理与技术 三? ? 、基因克隆所需要的酶类 四? ? 、基因克隆所需要的载体 五? ? 、基因克隆的方法 学习目的： 1.掌握基因工程的诞生在理论上的三大发现和技术上的三大发明。 2.掌握基因工程的内容（基因工程操作流程） 3.了解基因克隆的原理。 4.了解基因克隆的主要酶类。 5.了解载体DNA 必须具备的条件。 一、基因工程的诞生 ? ⑴　理论上的三大发现* ?? ? ? 生物的遗传物质是DNA（20世纪40年代） ?? ? ? DNA分子的双螺旋结构和半保留复制机制（20世纪50年代） ?? ? ? 确定了遗传信息的传递方式：遗传信息是以密码子方式传递的，三个核苷酸组成一个密码子，编码一个氨基酸。（1961-69） ⑵ 技术上的三大发明* ?? ? ? 限制性内切酶和DNA连接酶的发明 ?? ? ? 基因工程的载体的发明 ?? ? ? 逆转录酶的发明 二、基因工程概述 ? ? ? 遗传工程一般可分为广义和狭义的两种。广义的遗传工程包括细胞工程、染色体工程、细胞器工程等。狭义的遗传工程即是通常讲的基因工程。本节只介绍基因工程。 ? ? ? 基因工程中的DNA重组主要是指创造自然界中没有的DNA分子的新组合。这种重组不同于经典遗传学中经过遗传交换产生的重组。基因工程是采用分子生物学、核酸生物化学以及微生物遗传学的现代方法和手段建立起来的基因操作技术。 基因工程 ?? ? ? 从细胞和组织中分离DNA。 ?? ? ? 利用能识别特异DNA序列的限制性内切核酸酶酶切DNA分子，制备DNA片段。 ?? ? ? 将酶切的DNA片段与载体DNA连接，构建重组DNA分子 ?? ? ? 将重组DNA分子导入宿主细胞后，使其能在细胞内复制，产生多个完全相同的拷贝，即克隆(clones)。 ?? ? ? 重组DNA能随宿主细胞的分裂而分配到子细胞，使子代群体细胞均具有重组DNA分子的拷贝。 ?? ? ? 能从宿主细胞中回收、纯化和分析克隆的重组DNA分子 ?? ? ? 克隆的DNA能转录成mRNA、翻译成蛋白质。能分离、鉴定基因产物。 三、基因工程的内容 ? 基因工程的操作流程* ? 载体 目的基因 ? ? ?? 构建DNA重组分子（载体+目的基因） ? 转化/转染（使DNA重组分子进入寄主细胞） ? ? 表达（外源基因在寄主细胞中表达） ? ? 基因工程产品的分离、纯化（得到转基因植株） ? ? 第一节植物基因克隆的原理与技术 一、基因克隆的原理 植物基因克隆的目的是通过一定的遗传手段，将生物体基因组中的一段DNA分子或者所编码的cDNA分子分离出来，并对其结构、表达、功能等各个方面进行研究。它涉及核酸分子的切割、连接、扩增和转移等几个过程，这些不同的过程都要求有一定功能的酶类参与，它们包括核酸分子的切割酶类、连接酶类、扩增酶类以及核苷酸的保护酶类等。 （一） DNA的结构与功能 1．DNA的组成； 2．DNA结构； 3．DNA的复制 4．DNA作为遗传物质的优点 (1)信息量大，可以微缩； (2)表面互补，电荷互补，双螺旋结构说明 了精确复制的机理； (3)核糖的2位脱氧，在水溶液中稳定性好； (4)可以突变，以求进化； （二）DNA的变性、复性与杂交 在加热或某些试剂的作用下，DNA配对碱基之间的氢键结构受到破坏，双链DNA的多核苷酸链能完全分离，分离过程称为变性(denaturation)或熔解(melting)。能使DNA变性的试剂称为变性剂，如尿素、甲酰胺等。变性的DNA为单链DNA。变性DNA在一定条件下能恢复其双螺旋结构，这个过程叫DNA复性(renaturation)。 杂交 当复性的DNA分子由不同的两单链分子形成时，称为杂交(hybridization)。 复性是分子杂交的理论基础。 不仅DNA—DNA的同源序列之间可以进行杂交，而且DNA—RNA之间只要存在互补的碱基序列也可以进行杂交。 遗传的中心法则 DNA复制 ? ? 转录 调控 逆转录 翻译 RNA复制 蛋白质 ? 二、基因克隆所需要的酶类 1.Ⅰ