实验6黑曲霉的分离2.pptVIP

实 验 六;实验目的;实验原理;实验材料;土壤样品的采集用土壤采样器，将表层5cm左右的浮土除去，取5～25cm处的土样10～25g，装入事先准备好灭菌容器内扎好。编号并记录地点、土壤质地、植被名称、时间及其他环境条件。一般样品取回后应马上分离，以免微生物死亡。;制平板：在融化好的查氏培养基中加入庆大霉素素0.2mL/瓶 每组制2块PDA培养基、3块查氏培养基平板。在无菌培养皿底部注明分离菌名、稀释度、组别、班级。 ;制备土壤稀释液： 1. 称取土壤2g，放入18mL带有玻璃珠的无菌水三角瓶中，同时加入3滴10％苯酚溶液，振荡5min，即为稀释10－1的土壤悬液。2. 另取无菌离心管3支，用记号笔编上10－2、10－3 、10－4 ，再加入0.9mL无菌水。从10－1的土壤稀释液中吸取0.1mL加入第一只离心管中，并在试管内轻轻吹吸数次，使之充分混匀，即成10－2土壤稀???液。同法依次连续稀释至10－3、10－4土壤稀释液。 在土壤稀释过程中，需换用不同的枪头; 吸取稀释液无菌操作法分别吸取10－2、10－3 、10－4土壤稀释液0.1mL，分别加在已制好的3块查氏平板培养基上。 涂板用玻璃刮铲将稀释液在培养基上充分混匀铺平，正置于恒温箱培养。 培养置于30℃培养72小时。;菌种检测和扩培星期一过来，检查是否有产酸菌落（菌落初始白色，后变黑，由于筛选培养基中加有溴甲酚绿指示剂，黑曲霉产酸会与之反应，在菌落周围形成一个透明的变色圈。）； 并显微检测其是否为黑曲霉（分生孢子头呈褐黑色放射状，分生孢子梗长短不一，顶囊球形，双层小梗，分生孢子褐色球形。）确证后将其连续划线转接至PDA培养基上扩增培养。 ;黑曲霉的图片