曹凤明—微生物活菌计数方法—演示文稿2010.4.27.pptVIP

微生物活菌平板计数方法和技术;微生物计数方法种类;直接计数法;1. 显微镜直接计数 显微计数法适用于各种含单细胞菌体的纯培养悬浮液 血球计数板：菌体较大的酵母菌或霉菌孢子 细菌计数板：一般细菌 用途：快速了解发酵液的菌数。常用于生产线上生产过程控制。 缺点：不易区分颗粒、死菌体和杂菌，计数与真实菌数有很大差异。不能作为正规计数方法。 ;2. 比浊法 根据菌悬液的透光量间接地测定细菌的数量。细菌悬浮液的浓度在一定范围内与透光度成反比，与光密度成正比，所以，可用光电比色计测定菌液，用光密度(OD值)表示样品菌液浓度。根据浊度计算出细菌的数量。该方法一般可以估计出细菌的数量级。 经常用于一些特殊的微生物的快速计数，如光合细菌和藻类的测数。但是由于该方法仅能估测菌数，不能准确定量，而且由于一些颗粒和添加剂的作用，不能正确反映该样品的质量，所以在质检过程中不予采用。;3. 电子计数器计数法 工作原理是测定小孔中液体的电阻变化，小孔仅能通过一个细胞，当一个细胞通过这个小孔时，电阻明显增加，形成一个脉冲，自动记录在电子记录装置上。 该法测定结果较准确，但它只识别颗粒大小，而不能区分是否为细菌。因此，要求菌悬液中不含任何碎片。不适于微生物肥料产品的检测。;核酸计数法;活菌计数法（培养法）;平板计数法 ;平板计数法示意图;; ;平板计数法;（一）检测前的准备;培养基制备 培养基定义指人工方法配合而成的，专供微生物培养、分离、鉴别、研究和保存用的混合营养物制品。 培养基的选择 需要了解目的微生物的基本特性，选择正确的培养基 培养基的制备程序 按《微生物肥料实验用培养基技术条件》规定执行， NY/T1114-2006 培养基标识清晰，培养基名称，配制日期等。;平板制备;（二）操作过程;2.1 母液（基础液）的制备;2.2 样品稀释、加样和涂布;2.2.1 系列稀释 用无菌吸管分别吸取 5.0mL 上述母液菌悬液加至45 mL无菌水（150mL三角瓶）中，按1:10(10倍)进行依次稀释，分别得到10-1，10-2 ，10-3 ，10-4等浓度的菌悬液（每个稀释度应更换无菌吸管） 注：稀释度：10-1，10-2 ，10-3 ，10-4 ，10-5 相当于 稀释倍数：101， 102 ， 103 ，104 ，105 ;2.2.2 加样和涂布;;稀释、加样和涂布注意事项;2.3 平板的培养;2.4 菌落识别和计数;（三）计算;3.1 有效稀释度的选择;计数原则 以出现20~300个细菌菌落数的稀释度的平板为计数标准，丝状真菌为10~150个菌落数。 当只有一个稀释度，其平均菌落数在20～300之间时，则以平均菌落数计算。 若有两个稀释度，其平均菌落数均在20～300之间时，应按两者菌落总数之比值决定： 若其比值小于等于2应计算两者的平均数； 若大于2则以稀释倍数小的菌落平均数计算。;例次;3.2 标准差;平板上菌落数对应的标准差要求 ;标准差分析（例子）;3.3 有效活菌数和杂菌的计算;示例;重复;重复;重复;重复;;;样品编号;结果判定（示例）;回顾关键点;谢谢