細菌内毒素检查法.pptVIP

细菌内毒素检查法 ;主 要 内 容;细菌内毒素检查相关理论及概念;名词解释;细菌内毒素的发现;内毒素是由多糖、脂质和蛋白质组成的复合体。脂多糖又由化学和生物性质不同的特异O 抗原、核心多糖和类脂A（脂质A） 组成。;细菌内毒素参考品的建立; 标准内毒素与环境内毒素 标准内毒素： 指经人工提取精制并经生物效价测定的细菌内毒素，作为细菌内毒素检查的参考品。; 80年代以前以重量作为内毒素的单位 1982年USP20引入以生物效价为量值的内毒素单位（ EU， Endotoxin Unit）;CP2010年版规定内毒素标准品溶解后要在旋涡混合器上混合15分钟，以后的每一步稀释前要至少混合30秒，其他国家药典也有类似要求； 具有两极活性的内毒素分子在水中呈现不均匀分布 不按要求进行旋涡混合会使所稀释的内毒素效价偏低，造成灵敏度标示偏高、阳性对照不凝等不正确的实验结果;;鲎试验的发现;鲎试剂：鲎血液变形细胞裂解物冷冻干燥制备而成 鲎试剂的种类： 依据鲎的种类分： 美洲鲎试剂（LAL） 中国鲎试剂（TAL） 圆尾鲎试剂（CAL） 依据检查方法分： 凝胶法鲎试剂和定量法鲎试剂 依据内毒素和鲎试剂反应的专一程度分： 普通鲎试剂和特异性鲎试剂;C因子;BET的目的和前提;二、2010年版《中国药典》细菌内毒素检查法增修订情况; 2010版与2005版区别;2010版;2010版;; 修订背景;注射用药品、生物制品建立细菌内毒素检查法指导原则;需建立内毒素检查项目的品种;建立方法时对鲎试剂及样品的要求;确定内毒素限值;干扰实验;三、细菌内毒素检查法;细菌内毒素检查法;1、概述;凝胶法;光度测定法;实验基本流程图;2. 试剂、仪器设备等;国内鲎试剂的生产情况;细菌内毒素检查用水 1.药典规定： 凝胶法： 0.015Eu/ml 光度法： 0.005Eu/ml 且对内毒素试验无干扰作用 2. 和鲎试剂配套使用?;细菌内毒素国家标准品(RSE);细菌内毒素工作标准品(CSE) ;仪器设备与实验器具;实验器具;实验器具的洗涤与除内毒素 ;实验器具的洗涤与灭菌;实验器具的洗涤与灭菌;3.供试品溶液的配制 ;3.供试品溶液的配制 ;3.供试品溶液的配制 ;4. 内毒素限值的确定;;内毒素限值;内毒素限值;5.凝胶法鲎试剂灵敏度复核试验 ;5、鲎试剂灵敏度复核试验;5、鲎试剂灵敏度复核试验;5、鲎试剂灵敏度复核试验;5、鲎试剂灵敏度复核试验;5、鲎试剂灵敏度复核试验;5、鲎试剂灵敏度复核试验;5、鲎试剂灵敏度复核试验;结果判断;6、供试品的干扰试验 ;;进行干扰试验一般步骤：;预试验;6、供试品的干扰试验 ;凝胶法干扰试验溶液的制备 ;6、供试品的干扰试验 ;6、供试品的干扰试验; ;6、供试品的干扰试验 ;6、供试品的干扰试验;6、供试品的干扰试验;6、供试品的干扰试验;7、凝胶限度试验 ;7、凝胶限度试验;7、凝胶限度试验;7、凝胶限度试验;7、凝胶限度试验;7、凝胶限度试验;7、凝胶限度试验;凝胶法限量检查;8、凝胶半定量试验 ;8、凝胶半定量试验;8、凝胶半定量试验;8、凝胶半定量试验;8、凝胶半定量试验;8、凝胶半定量试验;8、凝胶半定量试验;细菌内毒素定量检查法;发展现状;分类;浊度法;;显色基质法;;内毒素与鲎试剂的凝胶反应;不同浓度的内毒素反应曲线;鲎试剂定量检测内毒素原理;检测样品原理;动态浊度法实验方法;实验器材;;标准曲线;标准曲线;10倍稀释标准曲线;2倍稀释标准曲线;理想标准曲线评价;光度测定法干扰试验溶液的制备;;供试品干扰试验;实验结果的判断;