通则0512高效液相色谱法2016年3月26日.docx

通则0512高效液相色谱法 （ 2016年3月26日 ） (药典四部60页) PAGE11 / NUMPAGES11 高效液相色谱法： 系采用高压输液泵将规定的流动相泵入装有填充剂的色谱柱，对供试品进行分离测定的色谱方法。 注入的供试品，由流动相带入色谱柱内，各组分在柱内被分离，并进入检测器检测， 由积分仪或数 据处理系统记录和处理色谱信号。 1.对仪器的一般要求和色谱条件 高效液相色谱仪由高压输液泵、进样器、色谱柱、检测器、积分仪或数据处理系统组成。 色谱柱内径一般为3.9～4.6mm，填充剂粒径为3～10μm。 超高液相色谱仪：是适应小粒径（约2μm）填充剂的耐超高压、小进样量、低死体积、 高灵敏度检测的高效液相色谱仪。 （1）?色谱柱 反相色谱柱： 以键和非极性基团的载体为填充剂填充而成的色谱柱。常见的载体有硅胶、聚合物复合硅胶和聚合物等；常用的填充剂优十八烷基硅烷键合硅胶、辛基硅烷键合硅胶和苯基键合硅胶等。 正相色谱柱： 用硅胶填充剂，或键合极性基团的硅胶填充而成的色谱柱。常见的填充剂有硅胶、氨基键合硅胶 和 氰基键合硅胶等。氨基键合硅胶和氰基键合硅胶也可用作反向色谱。  HYPERLINK /lizijiaohuansepu_109777/ \o 医学百科：离子交换色谱 离子交换色谱柱：用 HYPERLINK /lizi_109941/ \o 医学百科：离子 离子交换填充剂填充而成的色谱柱。有阳离子交换色谱柱和阴离子交换色谱柱。 手性分离色谱柱：用手性填充剂填充而成的色谱柱。 色谱柱的内径和长度，填充剂的 HYPERLINK /xingzhuang_109368/ \o 医学百科：形状 形状、粒径与粒径分布、孔径、表 HYPERLINK /mianji_11687/ \o 医学百科：面积 面积、键合基团的表面覆盖度、载体表面基团残留量，填充的致密与均匀程度等均影响色谱柱的性能，应根据被分离物质的性质来选择合适的色谱柱。 温度会影响分离效果，品种正文中未指明色谱柱温度时系指室温，应注意室温变化的影响。为改善分离效果可适当提高色谱柱???温度，但一般不宜超过60℃。 残余硅羟基未封闭的硅胶色谱柱，流动相的 HYPERLINK /pHzhi_110064/ \o 医学百科：pH值 pH值一般应在2～8之间。残余硅羟基已封闭的硅胶、聚合物复合硅胶或聚合物色谱柱可耐受更广泛pH值的流动相，适合于pH值小于2或大于8的流动相。 （2）?检测器 最常用的检测器为紫外-可见分光检测器，包括二极管阵列检测器， 其他常见的检测器有 HYPERLINK /yingguang_108420/ \o 医学百科：荧光 荧光检测器、 HYPERLINK /zhengfa_109735/ \o 医学百科：蒸发 蒸发光散射检测器、示差折光检测器、电化学检测器和质谱检测器等。 紫外-可见分光检测器、荧光检测器、电化学检测器为选择性检测器， 其响应值不仅与被测物质的量有关，还与其 HYPERLINK /jiegou_119288/ \o 医学百科：结构 结构有关； 蒸发光散射检测器和示差折光检测器为通用型检测器， 对所有物质均有响应，结构相似的物质在蒸发光散射检测器的响应值几乎仅与被测物质的量有关。 紫外-可见分光检测器、荧光检测器、电化学检测器和示差折光检测器的响应值与被测物质的量在一 定范围内呈 HYPERLINK /xianxingguanxi_120175/ \o 医学百科：线性关系 线性关系， 但蒸发光散射检测器的响应值与被测物质的量通常呈指数关系，一般需经对数 HYPERLINK /zhuanhuan_104031/ \o 医学百科：转换 转换。 不同的检测器，对流动相的要求不同。 紫外-可见分光检测器所用流动相应符合紫外－可见 HYPERLINK /fenguangguangdufa_24658/ \o 医学百科：分光光度法 分光光度法（通则0401）项下对 HYPERLINK /rongji_109987/ \o 医学百科：溶剂 溶剂的要求； 采用低波长检测时，还应考虑 HYPERLINK /youjirongji_150356/ \o 医学百科：有机溶剂 有机溶剂的截止使用波长，并选用色谱级有机溶剂。 蒸发光散射检测器和质谱检