卫生指示菌——菌落总数.docxVIP

(1)检验程序 依据《食品安全国家标准 食品微生物学检验 菌落总数测定》(GB 4789．22010)，检验程序见图3—6。 INCLUDEPICTURE \d /bjcrm_2012_manage/../UploadFile/201632515016677.png \* MERGEFORMATINET  (2)检验原理  HYPERLINK /HTML_Products/88/products_2688.html \o 水质磷酸盐（标样） 磷酸盐缓冲液和无菌生理盐水都可以作为样品 HYPERLINK /HTML_Products/23/products_43823.html \o 半胱氨酸稀释液 稀释液。检测时可任选一种。它们具有一定的离子浓度，能维持细胞内外的渗透平衡．最人限度地保证细菌细胞的完好．但又不使之繁殖。 平板计数琼脂(plate count agar，PCA)中的胰蛋白胨提供 HYPERLINK /HTML_Products/63/products_63.html \o 氨基酸混合溶液标准物质 氨基酸和其他含氮的化合物底物，是支持细菌生长所必需的。酵母提取物主要提供B族维生素，葡萄糖是能量来源。该培养基没有任何选择性和鉴别性，好氰或兼性好瓴的、能在36℃±1℃(水产品为30℃±1℃)繁殖的、不需要特别营养添加剂的细菌．郝可以生长。 (3)应注意的问题 1)稀释液灭菌时。会有一定的体积损失．如预先分装225 mL再灭菌，可能使稀释有偏差．所以最好配成大体积，在称样的时候进行无菌分装。 2)所用器皿和器械在灭菌前须彻底洗净，严格灭菌，不得残留有抑菌物质。 3)检验时应同时做稀释液和平皿的空白对照．注入PCA琼脂与样品一同培养，以了解稀释液和平皿的高压灭菌状况。 4)样品均质时不能产生高温。注意样品的性状，如果样品有可能刺破均质袋，可应用玻璃制或不锈钢制的均质器皿。对于不便于用均质器拍击的样品，可以在称样前用剪刀等合适的工具将样品尽量弄碎。酸性样品(食醋、酸性饮料)应注意使用20％无菌碳酸钠溶液校正pH至中性。 5)检样如为微生物制剂，应校正pH7．6后，再进行稀释培养，排除乳酸菌、酵母菌的干扰。 6)选择样品稀释度时，可以根据对样品自身性状和实际结合检测工作经验来确定；如果不能确定，必须多做几个稀释度；如果能确定样品杂菌较多。可以不必从10-1开始接种，从符合计数范围的稀释度开始??种即可。 7)含盐或面粉的样品，例如酱油、饼干等．经常会长出蔓延菌落，可在凝固后的琼脂表面覆盖一薄层琼脂培养基(约4 mL)，凝固后翻转平板培养。 8)预先融化的平板计数琼脂可以在55℃水浴中保温．琼脂不会凝固．平衡后的温度正适合倾倒平板。倾倒平板前，可将盛装琼脂的玻璃容器底部放在手腕上试一下温度，感觉能挨着但稍有一些烫就可以倒了；如果感觉不烫，就必须快速倒平板，不然很快琼脂就凝固了。 9)每个样品从开始稀释到倾注最后一个平板的时间不得超过15min，目的是保证细菌不繁殖，同时菌落能在平板上均匀分布，否则，时间放长会导致样液由于干燥而贴在平板上，倾注琼脂后不易摇开．菌落可能堆积在一起，影响菌落计数。 10)琼脂凝固后不要在室温长时间放置，应及时将平皿倒置培养。倒置培养可以防止平皿盖上的冷凝水滴落在琼脂上，使琼脂上的菌落被水冲开而影响计数。 11)检样稀释液有时带有食品颗粒，为避免与细菌发生混淆．可以作一检样稀释液与平板计数琼脂混合的平皿，不经培养。于4℃冰箱放置，以便在计数时用作对照。 12)到达规定培养时间应立即计数。不能马上计数时，平板应在0℃～4 C保存，但不得超过24h。 13)严格遵守实验室工作制度，做好实验室内部质控，消除可带来检验结果不确定度的各个环节。实验前后均应开启紫外灯(30min)对无菌室进行消毒，对无菌室紫外灯应定期进行照度测定，保证不小于70μW。检验人员要注意洗手消毒．在整个实验过程中要保证无菌操作。