1胡桃果皮提取液的除草作用探究.docVIP

PAGE  PAGE 4 核桃青皮中胡桃醌及其衍生物的高效分离 摘要：针对胡桃采摘及加工过程中产生有毒有害废弃物现象，该项目以胡桃青皮为原料，索氏抽取后用层析法制取胡桃醌，并检测其纯度和转移率；用层析所得胡桃醌进行浸种和喷洒幼苗，观察和测量其对种子萌发及其幼株生长的抑制作用。结果显示：以氯仿作提取剂，经索氏抽取后反复硅胶柱层析，用氯仿和石油醚－乙酸乙酯( 200:1)分阶段洗脱得到较纯的胡桃醌制备液，用EX-1600高效液相色谱仪测得的胡桃醌平均含量为0.39%，RSD= 1.78%。 1前言 胡桃属于胡桃科胡桃属，学名胡桃(Juglans regia L.)。胡桃在我国栽培历史长达两千多年，山西、河北、河南、山东、陕西、甘肃、青海及新疆南部多有栽培。我国胡桃种植面积达到三千一百七十五万亩，产量近五十万吨，总面积和产量均居世界第一位。胡桃青皮含有丰富的1, 8-桉叶素、胡桃醌、胡桃甙、金丝桃甙、挥发油等多种植物次生物质，具有明显的植物化感作用[4]。早在公元1世纪，普林尼[5]在《自然历史》中叙述了胡桃树的“树荫”是令人忧郁的，甚至会引起人的头痛和损伤种植在其附近的各种植物。R.F Davis从胡桃果和根中提取了胡桃醌，从而证实了普林尼所观察到的现象。我国老百姓也流传着这样一句俗语，“胡桃树下无丰草”。很显然胡桃的化感现象很早就被人们所认识，其危害也早已形成共识。 胡桃青皮又称青龙衣，为胡桃外部的一层厚厚绿色青皮。胡桃青皮中化学成分有39种挥发油和7种脂肪酸，其中挥发油占79.09%、脂肪酸占19.02%，其中的挥发油有烃类（26种、71.80%）、酮类（3种、10.83%）、醇类（6种、7.96%）、呋喃类（1种、5.79%）、酚类（1种、1.99%）、肟类（1种、0.95%）、酯类（1种、0.71%）七大类化合物[6]。1985年，许绍惠等[7]首次从胡桃青皮废弃物 图1 胡桃醌结构， 中分离提纯出胡桃醌（植物化感物质）, 实验结果显示：新鲜山胡 桃青皮中胡桃醌含量较高，达到0.42%，随着存储时间的延长，胡桃醌含量逐渐减少，存储9年的青皮中只含有0.09%。另外，姚焕英等[8]人分析了胡桃青皮中的9种醌类衍生物。 2 ???料与方法 2.1 材料、试剂与主要实验仪器 2.1.1 试验材料 供试材料：胡桃青皮采集于山西省吕梁市离石区王营庄，为中科农1号。 2.1.2 试验试剂 石油醚、乙酸乙酯、高锰酸钾、磷酸、磷酸二氢钠、氯仿均为分析纯，水为双蒸水、甲醇( 色谱纯)．胡桃醌标准品。 2.1.3 主要试验仪器及用具 主要仪器： KQ5200DB 型超声机( 江苏省昆山市超声仪器有限公司) ; FA2104N电子天平（上海精密科学仪器有限公司）； N－1000 型旋转蒸发仪( EYELA 上海爱朗仪器有限公司) ；EX1600高效液相色谱系统(上海伍丰科学仪器有限公司) ；离心机；粉碎机。 索氏提取器、锥形瓶（100mL）、容量瓶（10、100mL）、橡皮手套、镊子、培养皿、新华滤纸、金属筛、微型喷壶、尺子、放大镜、计算器、微孔滤膜（0.45 μm）。 （以上药品、仪器及用品均由吕梁学院生命科学系提供） 2.2 试验方法与步骤 胡桃醌提取及含量测定方法 剥取新鲜胡桃青皮（带上橡皮手套，因为对皮肤氧化能力很强），置室温下自然干燥7d，待彻底干燥后于粉碎机彻底粉碎，80目金属筛过筛。 含量测定方法的建立。 色谱条件：色谱柱为Exformma柱( 4.6 ×200 mm，5μm)，流动相为甲醇:水( 55:45)，水相用磷酸调PH值约为3.5(磷酸:水为1:500)，流速为0.8mL/min，检测波长为250nm，柱温为30℃。 标准曲线的绘制：精密称取胡桃醌标准品，加甲醇溶解并稀释成浓度为1.210 mg·mL-1的溶液， 用移液管分别取0.5、1、1.5、2.5、5 mL 置于10 mL的容量瓶，用甲醇稀释至刻度，浓度为0.0605、0.1210、0.1815、0.3025、0.6050 mg·mL－１，分别取10 μl依次进样，以峰面积值对样品浓度绘制标准曲线为 Y= 809630X-20.41，r= 0.9995，线性范围0.0605 mg·mL-1~ 0.6050 mg· mL－１。 供试液的制备：精密称取青皮粉末1g，用滤纸包裹，防止泄露。置于索氏提取器中，加90 mL 氯仿，水浴加热提取至溶液无色为止，过滤后置于100 mL 的容量瓶中，用少量氯仿洗涤索氏提取器，过滤后并入容量瓶中，用氯仿定容至刻度，混匀。用移液管精取10 mL，置10 mL 离心管中、水浴蒸干，温度设定为