张亚平—蛋白质组的技术.pptVIP

--周有文、张亚萍;什么是蛋白质组？;主要方法; 双向电泳技术、计算机图像分析与大规模数据处理技术以及质谱技术被称为蛋白质组研究的三大基本支撑技术。蛋白质组研究的技术路线如下图：;;蛋白质鉴定;;双向凝胶电泳;（一）、双向凝胶电泳的原理;SDS 十二烷基硫酸钠（SDS）是一种阴离子去污剂 ，带大量的负电荷 SDS与蛋白质结合，其所带负电荷大大超过蛋白质所带电荷量，消除了不同蛋白之间所带电荷的差异 SDS中，蛋白质迁移率只与蛋白质的分子量有关 ; 先根据蛋白质的等电点不同，利用等电聚焦进行第一向分离，将等电点相同的蛋白质集中在与等电点相同的pH区 再以与等电聚焦成90度角的方向进行SDS第二向分离，将等电点相同的蛋白质再按分子量大小彼此分开 以此将复杂蛋白混合物中的蛋白质在二维平面上以点的形状分离。 ; 蛋白质双向凝胶电泳是各种蛋白质分离分析方法中唯一能同时分辨上千个蛋白质点的技术 蛋白质组学研究中主要的分离技术 ;二）、双向凝胶电泳技术操作的基本过程;细胞的破碎 cell disruption;样品制备中遵循以下原则: 样本制备步骤尽可能简单, 以避免不必要的蛋白质损失； 裂解细胞或组织的方法应尽可能减少蛋白酶解(prot