第七章酶的抑制作用及抑制.pptVIP

第七章、酶的抑制作用及抑制动力学 ;二、区别方法 (一)物理方法: (二)动力学方法: 1.酶预先用抑制剂处理后 测定酶活力变化情况: 2.在测活系统中加入抑制剂, 然后加入不同酶量, 测定酶 活力变化情况: ;第二节不可逆抑制作用 一. 非专一性的不可逆抑制作用: 1.概念: 2. 非专一性的不可逆抑制剂 ? 酰化试剂:(酸酐,乙酰咪唑,硫代三氟乙酸乙酯,O-甲基异脲) --NH2 －NH－CO-R R-CO-X + E- --OH ?? E- －O －CO-R + HX --C6H5-OH －C6H5-O－CO-R --SH －S－CO-R ;?烷化试剂:(2.4-二硝基苯氟,碘代乙酸,碘代乙酰胺等) -NH3 -NH-R -SH -S-R R-X + E -COOH ?? E－-COOR + HX - S-CH3 -S? (CH3)-R 咪唑基NH -咪唑基N-R ;?含有活泼双键试剂:(N-乙基顺丁烯二酸抱亚胺(NEMI)、丙烯腈等 ?亲电试剂:(四硝基甲烷(TNM) ?氧化剂: H2O2, NBS等  作用-SH、Trp、吲哚基等 ?还原剂: ME, DTT等, 作用-S-S-、;二、专一性不可逆抑制剂: （一）Ks型不可逆抑制剂: 1.概念 2.抑制机理 E + I ? EI ? EIn 判断Ks型抑制剂作用是否发生在活性部位方法: ?化学定量法. ?底物、竞争性抑制剂保护方法 ?酶先可逆失活,再研究KS型抑制情况;（二）Kcat型不可逆抑制动力学 概念:自杀性底物 例如中E.coli中?-羟基葵酰硫酯脱水酶 CH3-(CH2)6-CH2-CH(OH)-CO-S-R R = -CH2-CH2-NH-CO-CH3 CH3-(CH2)6-CH=CH-CO-S-R (?-?反式双键) CH3(CH2)5-CH=CH-CH2-CO-S-R (?,?顺式双键);Kcat型抑制剂: 3.4-葵炔酰-N-乙酰半胱胺 CH3-(CH2)5-C?C-CH2-CO-S-R E CH3-(CH2)5 HC=C=CH-CO-SR CH3(CH2)5HC=C-CH2 -CO-SR 不可逆共价结合;第三节 可逆抑制作用的动力学: 可逆抑制作用: Reversible Inhibition 1.概念 2.类型: 竞争性抑制: Comp. C Competitive inhibition 非竞争性抑制 NonC. NC Non-Competitive 反竞争性抑制 UnC. UC Un-Competitive 混合型抑制 MT Mixed Type inhibition;一、竞争性抑制作用动力学 模型图: ;竞争性抑制作用动力学方程推导： 酶形式 矢量图 动力学项 E k-1k-3+k-3k2 ES k1k-3[S] EI