第12章 制备型高效液相色谱.ppt

第十二章 制备型高效液相色谱;在生物制药中的应用;第一节 高效液相色谱法简介;1.2 基本仪器装置;2.1 高效液相色谱仪组成; (1) 高压输液泵;(2)在线脱气装置 作用：脱去流动相中的溶解气体。流动相先经过脱气 装置再输送到色谱柱。 在线脱气、超声脱气、真空脱气等;（3）梯度洗脱装置;;3 色谱柱; 色谱柱填料;Pellicular particle; 色谱柱填料;三、高效液相色谱法的特点;四、制备型高效液相色谱与分析型高效液相色谱法的区别 ;五、色谱的基本理论及有关参数 ;有关参数;容量因子：溶质在固定相中的总摩尔数与流动相中总摩尔数之比。 选择因子：两组分容量因子的比值 容量因子、选择因子、理论塔板数对分离度的影响 ;六、制备型高效液相色谱的重要参数;七、分离机理和色谱类型 ;色谱介质按分离机理分为;第二节 分离方案的设计;一、分离方法之间的组合 四步纯化法： Preparation: Capture:(Isolate,concentrate and stabilize) Intermediate purification:(Remove bulk impurities) Polishing:(Achieve final high level purity) ;色谱之间的组合方案 AC、GF、IEX、HIC;二、分离条件的优化 合适的溶剂强度:容量因子k’ 足够的柱效N: 良好的分离选择性α:;; 制备分离的两种途径： 第一种，基本上同于分析型，进样量不过载，利用大内径的柱，通过调整分离方程中的有关参数来达到分离的最佳化。在该法中往往利用小颗粒的填料（约10μm）来制取少量价值高而难分离的物质。 第二种，使用大粒度填料（～50μm）的大内径柱，在过载情况下制备相对大量的纯物质。当α值相当大时（例如＞1.2），提高洗脱液的流速并不至于严重降低分离度，从而大大缩短分离时间。 ;三、制备型高效液相色谱常见问题及解决办法;;;;第三节 实验条件的选择 ;;二、柱填料 ;;;三、洗脱剂 ;四、仪器设备;第四节 操作变量的确定 ;柱内径，mm ;二、制备产率 ;三、回收率计算和纯度鉴定;蛇毒中溶栓组分的分离;制备型高效液相色谱的应用;;蛋白质的分离;;;;;示差折射检测器;