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·毕业设计（论文）材料之二（2） 本科毕业设计(论文)开题报告 题目： 解淀粉芽孢杆菌液体发酵条件的优化研究 课 题 类 型： 设计□ 实验研究□ 论文√ 学 生 姓 名： 韩维成 学 号： 3090403242 专 业 班 级： 生物技术092 系 别： 生物与化学工程学院 指 导 教 师： 孔芳 开 题 时 间： 2013年 3 月 20 日 一、毕业设计（论文）内容及研究意义 1．主要内容 （1）以芜湖市大浦现代农业技术中心为起点，选取感染炭疽病的蝴蝶兰(V31)病株为试验材料。 （2）配制选择培养基对对玻璃瓶中的杂菌进行富集和筛选。 （3）以PDA培养基培养、分离出单菌落，将分离出的菌株移至试管斜面中，观察各种菌体的生长情况、菌落特征和菌体形态。 （4）通过糖酵解，柠檬酸试验，甲基红试验，革兰氏染色，水解圈试验，吲哚试验等来确定分离出来的是否为解淀粉杆菌。 （5）从最佳碳源、氮源、初始PH值、发酵时间、发酵温度、接菌量和装液量的确定出发,针对纯化解淀粉芽孢杆菌进行发酵培养基的设计及发酵条件的优化。 2．研究意义 随着化学农药的大量使用，农药残留是一个亟待解决的问题。微生物因其具有种类繁多、代谢多样性等优势，可用于化学农药的降解，为解决农药残留问题提供了一种新的途径。因此，通过液体发酵技术开发利用微生物新资源具有很深远的意义。 　 本研究利用的解淀粉芽孢杆菌是枯草芽孢杆菌的一个近缘种，其产生的抗真菌活性物质与枯草芽孢杆菌近似，主要有抗真菌蛋白、表面活性素、伊枯草菌素 、几丁质酶等。试验在前期研究的基础上，通过对该菌株药瓶发酵培养基及发酵条件进行优化，为其商品化生产奠定一定的基础，以期为该菌株作为植物病害的生防制剂的开发和利用等提供理论和实践依据。 二、毕业设计（论文）研究现状和发展趋势 1．研究现状 解淀粉芽孢杆菌是一种与枯草芽孢杆菌亲缘性很高的细菌，在其自身的生长过程中可以产生一系列的代谢产物，这些代谢产物使得解淀粉芽孢杆菌能够具有广泛地抑制真菌和细菌的作用。因此，近些年大量学者在对解淀粉芽孢杆菌的新发现与新应用以及基因功能研究和发酵条件的优化做了大量的探索。为了有利于后人对解淀粉芽孢杆菌进行研究，将近些年国内外的研究归结于下： 　解淀粉芽孢杆菌新发现与新应用 李潞滨等人[1]从各地大花惠兰种植地采集的土样中筛选出对大花惠兰根腐病病原菌尖孢镰刀菌具有拮抗活性的解淀粉芽孢杆菌ZL725。王奕文等人[2]首次从不同甜瓜果实表面分离到1 株解淀粉芽孢杆菌，对灰葡萄孢、链格孢、尖孢镰刀菌、黑曲霉和粉红单端孢等8种果蔬采后病原真菌显著且广谱的拮抗作用。姜军坡等人[3]从健康牛的粪便中筛选出对大肠杆菌有抑制作用的解淀粉芽孢杆菌BN-9。欧雄常等人[4]从红树内生细菌分离出1 株能够拮抗辣椒疫霉的解淀粉芽孢杆菌RS261，经测定RS261 的防效在6 d 时＞80%、9 d 时的防效仍有60%时，清水已完全发病。12 d 时防病效果较佳的RS261 仍具有55%以上的防效。朱丽梅等人[5]从马尾松林中分离获得了1 株解淀粉芽孢杆菌。将细菌培养滤液分别稀释2、4、10倍处理松材线虫，72.00 h 后线虫的死亡率均达到100%； 线虫死亡后虫体消解，消解率分别为100.0% 、97.8%、96.4%。E.Arrebola[6]等人从水果表面分离出解淀粉芽孢杆菌PPCB004。发现其对7 种不同柑橘采后的真菌病原体具有抗菌活性。通过对其提取物的研究发现抑菌物质为伊草枯菌素A。对PPCB004 的使用方法进行了研究，在水果发病前1 d 和发病后1 d 使用均有较好的效果。 解淀粉芽孢杆菌基因功能与研究方法的探索 邱思鑫等人[7]对解淀粉芽孢杆菌进行了研究，通过重叠延申法将枯草芽孢杆菌的启动子PSJ2与绿色荧光蛋白基因的ORF 连接起来，构建绿色荧光蛋白表达盒，再通过Rco R I 和Pst I 双酶切将表达盒连接到pUSl86载体上，转化解淀粉芽孢杆菌TB2 菌株，得到可发出绿色荧光工程菌。在得到绿色荧光工程菌TB2 后，就可以较为准确地研究内生细菌在植物体内的定殖量。同时工程菌TB2对黄瓜枯萎病菌的拮抗作用与野生菌株相当。 （3） 解淀粉芽孢杆菌发酵条件与培养基配方优化的研究 A.T. Caldeira等人[8]通过电喷雾质谱（ESI）研究了解淀粉芽孢杆菌CCMI1051 在固定碳源为葡萄糖，增加4 种不同的氮源浓度的培养条件下的芽孢产量与对哈茨木霉的抑菌活性。在增加氮源浓度后所提升的抑