高中生物同步课件:1.2-基因工程的基本操作程序(新人教版选修3).ppt

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高中生物同步课件:1.2-基因工程的基本操作程序(新人教版选修3)

1.2 基因工程的基本操作程序;学习导航 1.掌握目的基因获取的常见方法。 [难点] 2.学会基因表达载体构建的方法和要求。 [重点] 3.理解目的基因导入受体细胞的具体过程。 4.掌握目的基因检测与鉴定的具体操作。 [要点];;基因文库包括两种:________文库,即包含一种生物所有基因的文库;__________文库,即只包含一种生物的一部分基因的文库,如cDNA文库。 2.利用PCR技术扩增目的基因 (1)PCR的含义:是一项在生物______复制特定DNA片段的核酸合成技术。 (2)目的:短时间内大量扩增目的基因。 (3)原理:________________。;(4)过程: 第一步:加热至90~95℃,_______________ ; 第二步:冷却至_________℃,引物与两条单链DNA相应互补序列结合; 第三步:加热至70~75℃,热稳定DNA聚合酶(Taq酶)从引物起始进行互补链的合成。 如此重复循环多次。 (5)特点:指数形式扩增。;想一想 1.PCR过程中,需要解旋酶吗?所需要的DNA聚合酶应具有什么特点? 【提示】 PCR过程中,DNA双链解开是在高温下完成的,不需要解旋酶;由于PCR过程温度较高,所以需要能耐高温的DNA聚合酶。;3.用化学方法人工合成 如果基因比较___,核苷酸序列又已知,也可以通过DNA合成仪用化学方法直接人工合成。 二、基因表达载体的构建 基因表达载体的组成:必须有启动子、____________、终止子以及标记基因等。;三、将目的基因导入受体细胞 1..转化 ___________进入受体细胞内,并且在受体细胞内维持稳定和表达的过程,称为转化。 2.常用的导入方法 (1)将目的基因导入植物细胞:采用最多的方法是________转化法,其次还有基因枪法和花粉管通道法。;(2)将目的基因导入动物细胞:最常用的方法是__________技术。此方法的受体细胞多是_________。 (3)将目的基因导入微生物细胞的方法: ①用_______处理细胞,使细胞处于能吸收周围环境中DNA分子的生物状态,这种细胞称为________细胞。 ②将重组表达载体DNA分子与感受态细胞混合,在一定温度下完成转化过程。;想一想 2.从细胞器的功能上分析,若通过基因工程生产人的糖蛋白,可以用大肠杆菌吗? 【提示】 不可以,糖蛋白上的糖链是在内质网和高尔基体上加工完成的,而内质???和高尔基体存在于真核细胞中,大肠杆菌是原核生物,细胞中不含有这两种细胞器。;四、目的基因的检测与鉴定 1..首先要检测转基因生物的DNA上是否插入了_________,方法是采用______________技术。 2.其次还要检测目的基因是否转录出了________,方法是采用__________技术。;3.最后检测目的基因是否翻译成________,从分子水平检测的方法是采用______________技术。 4.有时还需进行___________水平的鉴定。如需要做抗虫或抗病的接种实验等。;;比较项目;2.人工合成目的基因常用方法 人工合成目的基因的方法主要有两种。 (1)反转录法,主要用于相对分子质量较大而又不知其序列的基因,它是以目的基因的mRNA为模板,借助反转录酶合成碱基互补的单链DNA,然后在DNA聚合酶的作用下合成双链DNA,其过程如下:;(2)化学合成法,即依照某一蛋白质的氨基酸序列,通过密码子推算出其基因序列,然后直接合成目的基因,其过程如下:; (2012·青岛市高二期末)1970年,科学家证实了RNA病毒能依赖RNA合成DNA的过程,并发现了催化此过程的酶。下面为形成cDNA的过程和PCR扩增过程示意图。请根据图解回答下列问题:;(1)催化①过程的酶是________;核酸酶H的作用是________。 (2)③过程也称为DNA的变性,此过程在温度高达90~95 ℃时才能完成,说明DNA分子具有________性。;(3)由图中信息分析可知,催化②⑤过程的酶都是______________,两者在作用特性上的区别是____________________________________ ____________________________________。 (4)如果RNA单链中有碱基100个,其中A占25%,U占15%,则通过该过程合成的一个双链DNA片段中有胞嘧啶________个。;【解析】 根据图示可以看出,该过程是RNA在逆转录酶的催化作用下形成cDNA(负链DNA),构成RNA—DNA中间体。中间体中的RNA再经过RNA酶H水解,而以剩下的负链DNA复制成双链DNA。①过程是由RNA合成DNA的过程,需要逆转录酶进行催化。②过程是以单链DNA复制获得双链

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