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猪肉中瘦肉精的检测 猪肉中瘦肉精的检测 高峰 101279012 摘　要 鉴于盐酸克伦特罗(瘦肉精)在动物性食品中的残留对人体和国民经济造成了巨大的危害，本文介绍了动物肌肉组织中残留盐酸克伦特罗(瘦肉精) 的几种分析检测方法，并对未来的发展方向作了展望。 关键词：瘦肉精 GC-MS HPLC ELISA 1 引言 瘦肉精是一类药物，而不是某一种特定的药物，任何能够促进瘦肉生长、抑制肥肉生长的物质都可以叫做“瘦肉精”。在中国，通常所说的瘦肉精是指克伦特罗(Clenbuterol，CLB)，而普通消费者则把此类药物统称为瘦肉精。当它们以超过治疗剂量5—10倍的用量用于家畜饲养时，即有显著的营养“再分配效应”——促进动物体蛋白质沉积、促进脂肪分解抑制脂肪沉积，能显著提高胴体的瘦肉率、增重和提高饲料转化率，因此，β—受体激动剂被大量非法用于畜牧生产，其中最常用的有克伦特罗、莱克多巴胺、沙丁胺醇等。长期食用含有β—受体激动剂残留的食品将对人体健康产生极大的危害，可诱发和加重心率失常病人的病情，引起心室早搏，四肢、脸、颈部骨骼肌震颤；另外还能引起代谢紊乱，对糖尿病人可发生酸中毒或酮中毒。[1] 盐酸克伦特罗(Clenbuteerol，CLB) ，又名克喘素、氨哮素、双氯醇胺，俗名瘦肉精，化学名为α—[ (叔丁氨基) 甲基]—4—氨基—3，5—二氯苯甲醇盐酸盐，分子式为C12 H18Cl12N2O?HCl ，相对分子质量为313.65。 目前，检测瘦肉精残留常用的色谱技术有高效液相色谱(HPLC)、气相色谱—质谱联用法(GC—MS)、高效液相色谱—质谱联用法(HPLC—MS) 、毛细管电泳法(CE)等。中国已将高效液相色谱法（HPLC）作为检测饲料中盐酸克伦特罗残留的半确证法， 将GC—MS 法定为确证性方法，主要用于最后确认和仲裁。对于动物性食品，GB/T 5009.192—2003 “动物性食品中克伦特罗残留量的测定”规定的第一法为气相色谱—质谱法，第二法为高效液相色谱法，第三法为酶联免疫法。下面将会对这三种方法逐一进行说明，并简单介绍毛细管电泳法（CE）。 2 动物性食品（猪肉）中盐酸克伦特罗的检测方法 2.1 气相色谱—质谱法(GC—MS) GC—MS法优点是把色谱高效快速的分离效果和质谱高灵敏度的定性分析有机结合起来，能在多种残留物同时存在的情况下对某种特定的残留物进行定性、定量分析，而且具更高的检测极限。GC—MS法与HPLC法相比，检测灵敏度更高，假阳性率更低。下面将以岛津公司采用的GC—MS法检测瘦肉精为例，对仪器与试剂的选择、样品的处理方法等方面进行介绍。 2.1.1仪器与试剂 仪器：岛津GCMS—QP2010 Plus； 试剂：盐酸克伦特罗（Clenbuterol，CLB）标准品，内标（Clenbuterol—D9， CLB—D9），N ，O—双三甲基硅基三氟乙酰胺（BSTFA），C18固相萃取小柱（100 mg， 3 mL）标准溶液的配制：准确称取盐酸克伦特罗和内标的标准品，用甲醇配成浓度为1 mg/mL的标准储备液，放置于4℃冰箱中避光保存，使用时用甲醇稀释成1μg/mL的标准使用液和内标使用液。 2.1.2 分析条件 色谱柱：Rtx—5MS (30 m×0.25 mm×0.25 μm) 进样口温度：220℃ 柱温程序：70℃(0.6 min)—25℃/min—220℃(6 min)—25℃/min—280℃(5 min) 恒线速度方式， 柱流量0.9 mL/min 不分流进样，进样时间1 min 接口温度：280 ℃ 离子源温度：200 ℃ 溶剂切割时间：8 min 检测离子： CLB：检测 m/z 86， 187， 243， 262， CLB—D9：检测 m/z 95， 187， 262 以克伦特罗 (m/z86) 与内标峰 (m/z 95) 的峰面积比校准定量。 2.1.3 样品制备 精密称取(2 ± 0.01) g 己绞碎的猪肉于具塞离心管中，加入4 mL 0.1 mol/L 盐酸溶液，旋涡振荡5 min，超声10 min， 12000 r/min 离心5 min后，倾出上清液，沉淀再分别用0.1 mol/L 盐酸4 mL，2 mL 两次提取，提取方法同上，合并上清液。 将上清液全部上样至C18 柱，用5 mL 水清洗小柱后，使用0.8 mL 甲醇：20 mmol/L 磷酸溶液=1：1(v/v)的酸化甲醇解析，加磷酸缓冲液调至pH=7，定容至2 mL。将该溶液以0.1 mL/min的流速推过聚（甲基丙烯酸－乙二醇二甲基丙烯酸酯）毛细管整体柱萃取后，用0.2 mL 的甲醇解析，加50 μL 的内标使用液后以氮吹仪浓缩至干。加入100 μL 甲苯和100 μ