基因治疗-6课件.pptVIP

危敏 副教授;药物治疗 手术治疗 放射治疗 理疗;基 因 治 疗;一、基因治疗的概念;概念的发展;二、基因治疗的策略 ;(一)直接策略;基因矫正（gene correction） 指将致病基因的突变碱基加以纠正，而保留正常部分。 基因置换（gene replacement） 指通过同源重组（基因打靶）技术，将正常基因定点整合到靶细胞基因组内，以原位替换致病基因。 不涉及基因组整体改变的情况下对缺陷基因进行精确的原位修复，是最理想的治疗方式。;基因打靶技术;3. 基因增补（gene augmentation） 成熟的策略 是指不去除异常基因，将有功能的正常基因导入病变细胞或其它细胞后发生非定点整合，表达正常产物以补偿缺陷基因的功能，或使原有的功能得以加强。;4. 基因干预（gene interference） 是采用特定的方法，导入外源基因选择性地阻断、干扰、抑制和封闭有害基因在DNA、RNA和蛋白质水平的表达及其生物合成。 导入抑癌基因 反义核酸技术 (antisense technology)： ①反义RNA；②反基因技术；③核酶 RNA干扰（RNA interference);抑癌基因疗法;反义核酸;反义RNA技术;关键性问题;受体介导的反义RNA转移;反义RNA应用前景;反基因技术;核 酶;1981年，Cetch和Alfman首次发现了一类具有特异性剪切RNA活性的RNA分子。;核酶具有稳定的空间结构，不易受到RNA酶的攻击。 核酶在切断mRNA后，又可从杂交链上解脱下来，重新结合并切割其他的mRNA，效率高于反义RNA。 ;RNA干扰技术;miRNA;(二) 间接策略导入与致病基因无直接联系的治疗基因;1.免疫基因治疗;Tumour Necrosis Factor;2.分子化疗; (1) 自杀基因疗法 ;自杀基因;;; (2) 化疗保护性基因治疗; (3) 药物增敏基因治疗;3.特异性细胞杀伤;特异性细胞杀伤;三、基因治疗的基本流程;基因治疗的方式;;基因治疗的种类;体细胞治疗的概念;（一）外源基因的选择与制备 ;外源基因的选择原则;（二）载体的选择与构建 ;逆转录病毒结构;逆转录病毒的基因组结构;逆转录病毒的生活史;病毒载体构建;包装细胞;假病毒颗粒;Vector DNA;;逆转录病毒载体的特点;问题;腺病毒载体;常用的病毒载体及其基因转移的特点;(三) 靶细胞的选择 ;靶细胞的选择 ;(四) 基因转移;脂质体 liposomes; 其基本原理是利用阳离子脂质体单体与DNA混合后，可以自动形成包埋外源DNA的脂质体，然后与细胞一起温育，即可通过细胞内吞作用将外源DNA转移到细胞内。 ;(五) 基因转染细胞的筛选与鉴定;(五) 基因转染细胞的筛选与鉴定;(六) 回输体内;第一军医大学分子生物学研究所;基因治疗的应用;遗传病的基因治疗;遗传病基因治疗的临床研究;“先天性重症联合免疫缺陷综合征”(SCID);Ashanti De Silva was the first patient to be treated with gene therapy in 1990. She received infusions of T cells that had been transduced with a gene for ADA (an enzyme that she lacks);ADA缺陷病的分子机制;1）单个核细胞的分离：使用淋巴细胞分层液分离患儿血中单个核细胞； 2）单个核细胞培养：以“CD3抗体 + IL2” 体外培养以刺激T细胞增殖，分化； 3）逆转录病毒载体介导外源基因（治疗基因 + 标志基因）转染T细胞； 4）将转染细胞回输给患儿体内。;肿瘤的基因治疗策略;肿瘤的基因治疗策略;三、调节和增强机体的免疫功能 1. 细胞因子基因导入免疫细胞 2. 基因修饰的树突状细胞 3. 分泌免疫毒素的T淋巴细胞 4. 肿瘤DNA疫苗;肿瘤基因治疗临床试验方案;病毒性疾病的基因治疗;中国的基因治疗;基因治疗药物;基因治疗存在的问题;1999年“杰辛格”基因疗法失败. 18岁的泽西·杰辛格患有鸟氨酸氨甲酰基转移酶(OTC)缺失症，接受基因疗法后意外死亡。;;;;;现状及展望;本章小结;本章小结;思 考 题